脂褐質(LF)測定試劑盒(熒光比色法) Lipofuscin (LF) measurement kit 50管/48樣 盒
組織中脂褐質的測定 一、測定原理： 脂褐質（Lipofuscin LP）是丙二醛與游離氨基的物質交聯而成的具有熒光的化合物，可以用有機溶劑混合液萃取，用熒光分光光度計測其強度。
二、操作步驟：
㈠準備工作：
1、10ml的玻璃試管，數量為n（樣本管）+1（空白管）+1（標準管） ①如果您對結果要求十分，則您的空白管和標準管應該各2只 ②因實驗中間要換三次管子，并且為防止實驗中間可能有管子被污染，因而必須多準備幾只。 所以玻璃管總數為（n+2+2）×3+多準備的幾只管子。 ③實驗中所用的玻璃器皿均需經過10%硝酸浸泡24小時后，自來水沖洗干凈，再經蒸餾水沖洗2～3遍，干燥后再用。不要用洗衣粉洗，因洗衣粉內含有大量熒光劑，不容易沖洗干凈。 2、2套硬膜外穿刺針（本公司有購） 3、1支5ml玻璃移液管，1支2ml玻璃移液管 ㈡詳細操作： 1、 稱取適量的組織塊，約300mg左右，按照實驗方法學組織勻漿的制備加入9倍的蒸餾水制成 10%的水相組織勻漿。 2、 脂褐質(LF)測定試劑盒(熒光比色法)取水相組織勻漿2ml（取樣前必須將組織勻漿充分混勻或搖勻），用5ml的玻璃移液管加入經 50℃～60℃*預熱后的有機溶劑混合液4ml；在混勻器上抽提30秒（即混勻30秒）間歇10秒，共抽提3次**。 3、 以3000～3500轉/分離心10分鐘，此時試管中液體分為三層，上層為水相，中層為組織沉淀 層，下層為含有脂褐質的有機溶劑混合液層。 4、用硬膜外穿刺針小心吸凈上層水相，再用另一套硬膜外穿刺針，裝上針芯，沿管壁穿過中層， 插到管底，再拔出針芯，吸取下層含有脂褐質的有機溶劑混合液2 ml多到相應已編好號的第二套玻璃管中（注意：千萬不可將水混入其中，若混入水，應再離心一次，再次用硬膜外穿刺針***，裝上針芯，沿管壁插到管底，拔出針芯，吸取下層含有脂褐質的有機溶劑混合液） 5、用2ml玻璃移液管移取2ml含有脂褐質的有機溶劑混合液到相應已編好號的第三套玻璃管中， 再加入0.2ml的試劑二，輕輕搖勻，使之澄清透明。 6、將上述液體置紫外燈下放置60秒，倒入石英比色杯中，用熒光光度計測定其熒光強度。 以0.1μg/ml的奎寧液為標準，試劑一與試劑二的有機溶劑混合液為空白，狹縫4.4，靈敏度3.6，激發波長（EX）360nm、發射波長(EM)450nm（在此條件下，標準品的熒光強度為55～60U），測定樣本的熒光強度。 注：* 可以將有機溶劑混合液放入50℃～60℃左右的水浴箱中預溫20分鐘以上，或者放70℃～ 80℃的水中，時間可縮短。 ** 有些情況下（例如天涼時）抽提次數可再多1～2次，間隔期間將試管放入熱水中加溫， 因為脂褐質在熱的有機溶劑中易溶解。由于管子中液體比較多，為更好的混勻并且防止液體濺出，建議用帶蓋的玻璃管或用普通玻璃管加蓋保鮮薄膜，用中指和食指夾住玻璃管，拇指將蓋有保鮮薄膜的玻璃管口按緊，不可滿把抓玻璃管，否則不能充分混勻。 *** 吸取有機溶劑的第二套硬膜外穿刺針必須在每次使用前用有機溶劑混合液沖洗干凈。 如果您的比色皿較多時，您可以一只作空白，一只作標準，另一只作測定。如果比色皿較少，則在空白、標準、測定相互換著比色時，要將比色皿用有機溶劑洗干凈。如果有水分時也應用機溶劑洗干凈。
三、脂褐質(LF)測定試劑盒(熒光比色法)計算： 1、計算公式： ()() gmlmlggg2.04)/1.0(/參與抽提的樣品含量抽提液體積標準品濃度標準管的熒光強度空白管熒光強度樣品管熒光強度組織）（脂褐質含量××?=μμ *取10%組織勻漿2ml中含0.2g組織。
