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細(xì)胞或組織的具體方法

時(shí)間:2015-4-15閱讀:156
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    因此,還必須借助于組織化學(xué)方法將抗原抗體反應(yīng)部位顯示出來(lái)(常用顯色劑DAB顯示為棕黃色顆粒)。通過(guò)抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng),顯示細(xì)胞或組織中的化學(xué)成分,在顯微鏡下可清晰看見(jiàn)細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)物,從而能夠在原位確定某些化學(xué)成分的分布、含量。組織或細(xì)胞中凡是能作抗原或半抗原的物質(zhì),如蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受體、酶、激素、核酸及病原體等都可用相應(yīng)的特異性抗體進(jìn)行檢測(cè)。免疫組織化學(xué)染色方法

    1、按標(biāo)記物質(zhì)的種類(lèi),如熒光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根過(guò)氧化物酶和堿性磷酸酶)、鐵蛋白、膠體金等,可分為免疫熒光法、放射免疫法、酶標(biāo)法和免疫金銀法等。

    2、按染色步驟可分為直接法(又稱(chēng)一步法)和間接法(二步、三步或多步法);與直接法相比,間接法的靈敏度提高了許多。

    3、按結(jié)合方式可分為抗原—抗體結(jié)合,如過(guò)氧化物酶-抗過(guò)氧化物酶(PAP)法和親和連接,如卵白素-*-過(guò)氧化物酶復(fù)合物(ABC)法、鏈霉菌抗*蛋白-過(guò)氧化物酶連結(jié)(SP)法等,其中SP法是zui常用的方法??共《净钚詼y(cè)定法:檢測(cè)樣品中干擾素的含量zui常用的方法是檢測(cè)其抗病毒活性,其檢測(cè)原理是用細(xì)胞因子樣品處理易感細(xì)胞,使細(xì)胞建立抗病毒狀態(tài),然后用適量病毒攻擊細(xì)胞,評(píng)價(jià)病毒的復(fù)制量或病毒引起細(xì)胞病變的程度即可判斷樣品中細(xì)胞因子的生物活性。

    常用于檢測(cè)抗病毒活性的細(xì)胞株有WISH,Hep2/c,L929,A549和MDBK等。其中WISH和Hep2/c細(xì)胞株用以檢測(cè)人干擾素,L929細(xì)胞株用于檢測(cè)小鼠干擾素,Ratec細(xì)胞株用于檢測(cè)大鼠干擾素,而MDBK細(xì)胞株則可用于檢測(cè)多種族的IFN-α和IFN-γ。常用于攻擊細(xì)胞的病毒有濾泡性口炎病毒(VSV)、鼠腦心肌炎病毒(EMCV)以及Sindbis virus等病毒。

    檢測(cè)抗病毒活性包括測(cè)定細(xì)胞因子抑制病毒的致細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE)、抑制病毒蝕斑形成或抑制病毒的產(chǎn)量等。 IFN的抗病毒活性通常以每毫升樣品中所含的單位數(shù)(U/ml)表達(dá),IFN的純度則以每毫克蛋白質(zhì)中所含的單位數(shù)(U/mg)或IFN的量(μg/mg)表達(dá)。IFN抗病毒活性單位的定義是指能抑制50%細(xì)胞病變或50%病毒空斑形成效應(yīng)的IFNzui高稀釋度的倒數(shù)。

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