在動物ELISA試劑盒中一般有3次加樣步聚，即加標本，加酶結合物，加底物。加樣時應將所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產生氣泡。
   加標本一般用微量加樣器，按規定的量加入板孔中。每次加標本應更換吸嘴，以發生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測定(如間接法ELISA)需用稀的血清，可在試管中按規定的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中加入稀釋液，再在其加入血清標本，然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。

    加酶結合物應用液和底物用液時可用定量多道加液器，使加液過程迅速完成。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或，以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質。聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的，而在洗滌時又應把這種非特異性吸附的干擾物質洗滌下來。可以說在動物ELISA試劑盒操作中，洗滌是zui主要的關鍵技術，應引起操作者的高度重視，操作者應嚴格按要求洗滌，不得馬虎。
洗滌的方式除某些動物ELISA試劑盒儀器配有特殊的自動洗滌儀外，手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種，過程如下：
(1)浸泡式 a.吸干或甩干孔內反應液;b.用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后，即甩去);c.浸泡，即將洗滌液注滿板孔，放置1-2分鐘，間歇搖動，浸泡時間不可隨意縮短;d.吸干孔內液體。吸干應*，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干;e.動物ELISA試劑盒重復操作c和d，洗滌3-4次(或按說明規定)。在間接法中如本底較高，可增加洗滌次數或延長浸泡時間。