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北京綠源伯德生物科技有限公司
ph計電極暫無信息 |
閱讀:759發布時間:2016-12-31
注意:正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義
超氧陰離子自由基作為生物體代謝過程中產生的一種自由基,可攻擊生物大分子,如脂質、
蛋白質、核酸和聚不飽和脂肪酸等,使其交鏈或者斷裂,引起細胞結構和功能的破壞,與機
體衰老和病變有很密切的關系,清除超氧陰離子自由基的研究已經得到了廣泛的關注。
測定原理
AP-TEMED 系統產生超氧陰離子,與鹽酸羥胺反應生成 NO2-,NO2-與對氨基苯磺酸和 α-
萘胺的作用生成紅色的偶氮化合物,在 530nm 處有特征吸收峰,樣品對超氧陰離子的清除
能力與 530nm 的吸光值呈負相關。
自備實驗用品及儀器
天平、研缽、低溫離心機、可見分光光度計、1 mL 玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制
提取液:液體 50mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:液體 2mL×1 瓶,4℃避光保存。
試劑二:粉劑×1 瓶,4℃避光保存。臨用前加 8mL 蒸餾水充分溶解。
試劑三:液體 10mL×1 瓶,4℃保存。
試劑四:液體 10mL×1 瓶,4℃避光保存。
試劑五:液體 10mL×1 瓶,4℃避光保存。
樣品處理
1. 組織:按照質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g,加入 1mL
提取液)加入提取液,冰浴勻漿后于 4℃,10000g 離心 10min,取上清置于冰上待測。
2. 細胞:按照細胞數量(104 個):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500
萬細胞加入 1mL 提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,
總時間 3min);然后 4℃,10000g 離心 10min,取上清置于冰上待測。
3. 培養液或其它液體:直接檢測。
4. 粉劑藥物可配制成相同濃度,比如 1mg/mL。
| 空白管 | 對照管 | 測定管 |
試劑一(μL) | 40 | 40 | 40 |
試劑二(μL) |
| 160 | 160 |
H2O(μL) | 260 | 100 |
|
充分混勻,25℃反應 1min | |||
樣品(μL) |
|
| 100 |
試劑三(μL) | 200 | 200 | 200 |
充分混勻,37℃反應 30min | |||
試劑四(μL) | 200 | 200 | 200 |
試劑五(μL) | 200 | 200 | 200 |
充分混勻,37℃顯色 20min,于 1mL 玻璃比色皿,以空白管調零,在 530nm 處測定對照管 和測定管的吸光值,分別記為 A 對照管和 A 測定管。 |
計算公式
超氧陰離子清除率 I%=
A對照管 - A測定
A對照管
´100%
注意事項
1. 試劑一 4℃可保存 2 個月,配制好的試劑二 4℃可保存一周,建議實驗前配制,并盡快
使用。
2. 樣品處理完后立即進行測定,或者低溫保存不超過 24 小時。
商鋪:http://www.kindlingtouch.com/st147050/
主營產品:elisa試劑盒,sigma原裝試劑,Peprotech因子,Amresco試劑,血清,國產試劑,Roch,Abcam,R&D,qiagen等多個品牌的進口試劑
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