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上海研晶生物技術有限公司
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閱讀:411發布時間:2015-7-26
上海研晶生物技術有限公司是一家集研發、銷售、實驗技術服務于一體專注于生命科學和生物技術領域的高科技企業。致力于向國內生命科學研究人員提供*的產品和服務。經過公司的不懈努力,研晶建立了涵蓋分子生物學、細胞生物學、免疫學、信號傳導和神經科學等領域的產品供應線,在各個領域內向用戶提供世界水平和高質量的產品。 下面一一介紹各類組織的取材技術:
(一)血液細胞的取材
血液及淋巴組織中的血細胞、淋巴細胞的取材,一般多抽取靜脈外周血,或從淋巴組織中(如脾、扁桃體、胸腺、淋巴結等)分離細胞,取材時應注意抗凝,通常采用肝素抗凝,常用肝素濃度為8~10u/mL血,抽血的針筒也要用肝素濕潤,若從血站取來的獻血員的血液,因血站不用肝素抗凝劑,常用含枸椽酸鹽抗凝,對此類血標本千萬不能用含鈣、鎂離子的洗液來處理細胞,因此時的鈣、鎂離子可加速血液中*促進血液凝固而影響收獲血細胞及淋巴細胞。此外要嚴格無菌,盡量新鮮使用。
(二)骨髓、羊水、胸/腹水細胞取材
取上述標本時,除嚴格無菌,注意抗凝外,還要盡快分離培養,一般無需其他處理,離心后,用無鈣、鎂PBS洗兩次,再用培養液洗一次后即可培養,不宜低溫存放。具體操作詳見后面有關章節。
(三)動物組織取材
1、鼠胚組織取材
首先用引頸或氣管窒息致死法處死孕期合適的動物,然后將其整個浸泡在含有75%酒精的燒杯中,5分鐘后(注意時間不能太長,以避免酒精從口或其他通道進入體內,影響組織活力),取出動物,在消毒過的木板上可用無菌的圖釘或大頭針固定四肢,切開皮膚,用無菌操作法解剖取胚或用無菌*挾起皮膚、用無菌眼科剪沿軀干中部環形剪開皮膚,用*分別挾住兩側皮膚拉向頭尾,把動物反包,暴露軀干,然后再固定,更換無菌解剖器材,采用無菌操作法解剖取出胚胎。
2、幼鼠胚腎(或肺)取材
幼鼠采用上述方法處死消毒后,腹部朝上固定在木板上,先切開游離毛皮并拉開至兩側:然后采用無菌法打開胸腔取肺,或背部朝上固定在木板上,先將背部毛皮切開游離并拉向兩側,然后采用無菌法從背部打開腹腔取腎。
(四)人胚體組織取材
在局部先用碘酒后用75%酒精棉球消毒,無菌法取人胚肺(腎),方法與鼠類相同。
(五)雞(鴨)鳥類胚胎組織取材
取孵化至適當胚齡(9~12天)的胚蛋,用照蛋燈在暗處燈檢,若有豐富血管、胚體有運動的胚蛋,說明胚體發育良好,并用有色筆劃出氣室和胚體位置。將胚蛋置于蛋架上,先用溫水清洗蛋殼,再用75%酒精棉球擦干,經碘酒、75%酒精消毒后,在無菌條件下采用無菌法用剪刀或中號鑷子打開氣室,沿氣室邊緣去除蛋殼,再用*撕去殼膜,暴露出雞胚,再用彎頭鑷輕挑起胚頭,取出胚胎,放入無菌平皿中,解剖取材。
(六) 皮膚和粘膜的取材
皮膚和粘膜是上皮細胞培養的重要組織來源,主要取自于手術過程中的皮片,方法似外科取斷層皮片手術操作,但面積一般2~4cm2 即可,這樣局部*痕,若對燒傷皮膚進行上皮細胞膜片移植,可從大腿或臀部取較大皮片,可取2~4cm2皮片,但取材時不要用碘酒消毒;若培養上皮細胞,取材時不要切取太厚,盡可能去除所攜帶的皮下或粘膜下組織;若欲培養成纖維細胞,則反之。皮膚粘膜與外界相通部位,因表面細菌、霉菌很多,取材時應嚴格消毒,必要時要用高濃度抗菌素和適量兩性霉素B漂洗、浸泡。
(七)內臟和實體瘤的取材
內臟除消化道外基本是無菌的,但取材時要明確和熟悉所需組織的類型和部位,實體瘤取材時要取腫瘤細胞豐富的區域,要避開破潰、壞死液化部分,以防污染,盡量去除混雜的結締組織,否則培養后,由于成纖維細胞的生長給以后的培養工作增加困難。
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