多酚氧化酶(PPO)（檢測服務(wù)）

服務(wù)介紹：

多酚氧化酶(PPO)檢測試劑盒(鄰苯二酚比色法)檢測原理是以鄰苯二酚作為底物，在酶促反應(yīng)的最適條件下采用每隔一定時間測定產(chǎn)物生成量的方法，于分光光度計420nm處檢測吸光度，以吸光度變化所需酶量進(jìn)行計算，主要用于植物組織的裂解液或勻漿液、血清等樣品中內(nèi)源性的多酚氧化酶活性，尤其適用于檢測水果中多酚氧化酶活性。

背景介紹：

多酚氧化酶（PPO）是一種普遍存在于植物、真菌、昆蟲的質(zhì)體中的酶，甚至在土壤中腐爛的植物殘渣上也可以檢測到其活性。它又稱兒茶酚氧化酶、酪-氨酸酶、苯-酚酶、甲酚酶、鄰苯二酚氧化還原酶，是六大類酶中的大類氧化還原酶。PPO主要是一類含銅的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化產(chǎn)生醌，從而引起褐化。

操作步驟（僅供參考）：

1、 準(zhǔn)備樣品：

①植物樣品：取3g植物組織或水果中層果肉加入6ml預(yù)冷的PPO Lysis Buffer研磨或勻漿，4℃ 10000g離心15~20min，留取上清液。

②血漿、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以用于該試劑盒的測定

③細(xì)胞或組織樣品：取恰當(dāng)?shù)募?xì)胞或組織裂解液，如有必要用PPO Lysis Buffer進(jìn)行適當(dāng)勻漿，4℃ 10000g離心15~20min，取上清液，-20℃凍存，用于多酚氧化酶的檢測。

④高活性樣品：如果樣品中含有較高活性的多酚氧化酶，可以使用PPO Lysis Buffer進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>

2、 PPO加樣：按照下表設(shè)置對照管、測定管，注意：對照管、測定管中樣品為同一待測樣品，但對照管中為提前加熱煮沸5min的樣品；溶液應(yīng)按照順序依次加入，

 3、 PPO檢測：以對照管為對照(調(diào)零)，比色杯光徑1.0cm，立即分光光度計測定420nm處測定管的吸光度(記為A測定0)；1min后立即測定420nm處測定管的吸光度(記為A測定1)。建議加入PPO Assay buffer后立即檢測，加樣時間越短越好，其反應(yīng)基本在1~2min內(nèi)，其后反應(yīng)趨于平緩。

注意：該反應(yīng)系統(tǒng)是利用速率變化，求得相應(yīng)OD的變化，因此加入PPO Assay buffer立即計時很重要，每次檢測指標(biāo)不宜過多，否則有可能由于操作時間有差異進(jìn)而導(dǎo)致結(jié)果偏差。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

全自動生化儀檢測后導(dǎo)出結(jié)果，結(jié)果由EXCEL形式發(fā)送。

送樣須知：

1.南京和上海地區(qū)的客戶可提供上門取樣服務(wù)，提前一天聯(lián)系

2.外地客戶可郵寄樣本，樣本運(yùn)輸應(yīng)符合一般的生物學(xué)要求，密封加冰袋或者干冰運(yùn)輸

3.若細(xì)胞、血清、組織樣本具有潛在的傳染性或致病性，請務(wù)必提前告知

4.測試結(jié)束提供實(shí)驗(yàn)報告后，樣本可以保留1個月，若需保留樣本或者回收樣本請?zhí)崆案嬷?/span>

備注：本公司對客戶的項(xiàng)目的專有技術(shù)和資料（包括實(shí)驗(yàn)方案，測試結(jié)果，樣本等）負(fù)有保密的責(zé)任。

僅供科研實(shí)驗(yàn)用，不做其他用途！

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