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參 考 價(jià) | 面議 |
產(chǎn)品型號(hào)
品 牌GEMIG
廠商性質(zhì)其他
所 在 地上海
更新時(shí)間:2024-11-22 17:24:43瀏覽次數(shù):799次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來自 環(huán)保在線Masson染色實(shí)驗(yàn)代測(cè)服務(wù)
六胺銀染色實(shí)驗(yàn)代測(cè) 檢測(cè)服務(wù)
原位雜交(FISH單標(biāo))
服務(wù)介紹:
原位雜交原理:原位雜交是指將特定標(biāo)記的已知序列核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交,從而對(duì)特定核酸順序進(jìn)行精確定量定位的過程。原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進(jìn)行。
名稱 | 規(guī)格 |
原位雜交(FISH單標(biāo)) | 張 |
實(shí)驗(yàn)流程:
石蠟切片熒光探針原位雜交實(shí)驗(yàn)步驟
1、組織固定:組織取出洗凈后立即放入固定液(DEPC水配制)中固定2-12h。
2、脫水:組織固定完成后經(jīng)梯度酒精脫水后浸蠟,包埋。
3、切片:石蠟經(jīng)切片機(jī)切片,攤片機(jī)撈片,62°烤箱烤片2h。
4、石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-DEPC水洗。
5、消化:根據(jù)組織固定時(shí)間長(zhǎng)短,切片于修復(fù)液中煮沸10-15分鐘,自然冷卻。后基因筆畫圈,根據(jù)不同組織不同指標(biāo)特性,滴加蛋白酶K(20ug/ml) 37°消化20-30min。純水沖洗后PBS洗3次×5min。
6、預(yù)雜交:滴加預(yù)雜交液,37°C孵育1h。
7、雜交:傾去預(yù)雜交液,滴加含探針雜交液, 恒溫箱37度雜交過夜。
8、雜交后洗滌:洗去雜交液,2×SSC,37°C 洗10min,1×SSC,37°C洗2×5min,0.5×SSC室溫洗10min。若非特異雜交體較多,可以增加甲酰胺洗滌。
9、DAPI復(fù)染核:切片滴加DAPI染液,避光孵育8min,沖洗后滴加抗熒光淬滅封片劑封片。
10、鏡檢拍照:切片于尼康正置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。(紫外激發(fā)波長(zhǎng)330-380nm,發(fā)射波長(zhǎng)420nm,發(fā)藍(lán)光;FAM(488)綠光激發(fā)波長(zhǎng)465-495nm,發(fā)射波長(zhǎng)515-555 nm,發(fā)綠光;CY3紅光激發(fā)波長(zhǎng)510-560,發(fā)射波長(zhǎng)590nm,發(fā)紅光。)DAPI染核,為藍(lán)光。
送樣要求:
1、切片前處理要求:新鮮組織干冰運(yùn)輸后做冰凍切片;或取2mm左右厚度的新鮮組織,5min內(nèi)投入原位雜交固定液內(nèi)固定,4℃低溫保存運(yùn)輸,切勿冷凍結(jié)冰,盡快包埋切片后進(jìn)行原位雜交實(shí)驗(yàn),固定時(shí)間過長(zhǎng)影響核酸檢出率;
2、冰凍切片:冰凍切片-20℃運(yùn)輸;
3、石蠟切片:石蠟切片常溫運(yùn)輸;
4、細(xì)胞爬片:細(xì)胞爬片加原位雜交固定液固定15min后,換無酶PBS,密封,4℃運(yùn)輸。
單據(jù)填寫:
1、探針合成:需提供待測(cè)目的基因序列或基因登錄號(hào)、所需標(biāo)記類型;
2、自帶探針需告知完整探針信息;
3、寫明檢測(cè)要求。
請(qǐng)輸入賬號(hào)
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