RNA提取逆轉錄
服務介紹:
細胞中的RNA可分為信使RNA、轉運RNA和核糖體RNA三大類,不同組織總RNA提取實質就是將細胞裂解,釋放出RNA,并通過不同方式去除蛋白、DNA等雜質,最終獲得高純RNA產物的過程。再在逆轉錄酶的催化下,隨機引物、oligo(dT)或基因特異性引物的引導下合成互補的DNA (complementary DNA,cDNA)。
名稱 | 規格 | 建議檢測基因數 |
RNA提取逆轉錄 | /樣 | 1-6個基因 |
/樣 | 7-12個基因 | |
/樣 | 13-18個基因 | |
/樣 | 19個及以上基因 |
實驗流程:
取材-RNA提取-測濃度-逆轉錄成cDNA
其中mRNA、lncRNA、circRNA為普通逆轉錄;
miRNA采取特異性逆轉錄(需提供基因名稱和種屬,方便設計引物用于特異性逆轉錄 ),默認做莖環法的逆轉錄,如需做加尾法逆轉錄請特別備注說明。
送樣運輸要求:
1. 樣品處理
a) 動物組織:常規組織100mg,脂肪組織,結締組織,纖維化組織適當增加。將組織剪切成合適大小后(建議組織塊長寬高均不大于0.5 cm),然后迅速完-全浸泡于5~10倍體積的RNAsolid™試劑中。(注意:已浸入RNAsolid™試劑中的組織經平衡一段時間后,可從溶液中取出,切成更小的組織塊,再重新放回RNAsolid™試劑中;有些比較弱的液體滲透性組織如骨頭等,不適合用RNAsolid™試劑進行RNA保護。)
b) 植物組織:新鮮的葉、果肉、種子最少100 mg。將嫩葉,嫩莖組織切成合適的大小(建議長寬高均不大于0.5 cm)后,然后迅速完-全浸泡于5~10倍體積的RNAsolid™試劑中。(注意:某些植物組織天生具有的屏障,如葉子表面的蠟層可阻礙RNAsolid™試劑的滲透,對于此類組織,通常需破壞這些屏障層以允許溶液的浸透。)
c) 細胞等樣本:收集不少于10^6個細胞沉淀(用PBS清洗1-2次),干冰運輸。
d) 酵母、細菌等樣本:離心棄上清,收集一定量的菌體沉淀,干冰運輸。
e)全血:最少1 mL新鮮血液EDTA抗凝管,干冰運輸。
f)血清或血漿:最少1 mL,干冰運輸。
g)RNA樣品: OD260/280為1.8-2.0,濃度≥100 ng/μL,體積≥20μL,干冰運輸。
2. 樣品保存及運輸
加入有RNAsolid™試劑的樣本可在37℃保存1~2天,2天以后部分組織中的RNA會開始降解。室溫(25℃)穩定保存1周,不會有明顯的RNA降解發生。大部分樣品置于RNAsolid™試劑中,4℃條件下可穩定保存1個月,不會有明顯的RNA降解發生。長期存放可先將保存在RNAsolid™試劑中的樣本4℃浸透過夜,然后將RNAsolid™試劑吸出棄去,再將樣本放入-20℃或-80℃長期穩定保存3~5年。
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