信帆生物提供甲基化分析服務

DNA甲基化研究是表觀遺傳學的重要內容，真核生物中的甲基化僅發生于胞嘧啶，即在DNA甲基化轉移酶的作用下使CpG二核苷酸5’-端的胞嘧啶轉變為5’-甲基胞嘧啶。DNA甲基化通常抑制基因表達，去甲基化則誘導了基因的重新活化和表達。這種DNA修飾的方式在脊椎動物的胚胎發育過程中起著重要的調控作用，參與多種疾病包括各種腫瘤的發病機理，是目前表觀遺傳學研究的熱點。

主要技術原理

用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA，則未發生甲基化的胞嘧啶被轉化為尿嘧啶，而發生甲基化的胞嘧啶不變。根據某一待測位點或者調查的某一區域序列設計引物進行PCR擴增，通過PCR電泳、測序、熒光定量及質譜等方法對擴增產物進行檢測，根據檢測結果分析哪些位點發生了甲基化及其甲基化的頻率。

主要服務方案

1、甲基化特異性的PCR（Methylation-specific PCR，MSP）
   用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA，所有未發生甲基化的胞嘧啶被轉化為尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不變。設計針對某一待測位點的甲基化和非甲基化引物進行PCR擴增，通過電泳檢測MSP擴增產物判定待測樣本是否存在甲基化位點。

2、亞硫酸氫鹽測序法（Bisulfite sequencing PCR，BSP）
   用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA，未發生甲基化的胞嘧啶被轉化為尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不變。針對要調查的區域設計BSP引物進行PCR擴增，對擴增產物進行測序就可以判斷哪些CpG位點發生了甲基化；一般將PCR產物克隆后進行測序成功率會比較高。

信帆生物提供甲基化分析服務

實驗流程：

（1）BSP引物設計：針對感興趣的基因區域進行BSP引物的設計（擴增產物不超過400bp）

（2）亞硫酸氫鹽處理基因組DNA：提取基因組DNA并進行亞硫酸氫鹽的轉化

（3）PCR擴增目的片段：BSP引物擴增感興趣的區域

（4）克隆到載體：將PCR產物純化后連接到載體上

（5）克隆測序：挑取陽性菌斑，提取質粒并測序（通常測序5個或10個克隆）

（6）序列分析：對測序的結果進行比對和甲基化分析

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