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免疫組化實驗操作之組織石蠟切片制作

時間:2015/11/18閱讀:1978
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組織經石蠟包埋后制成的蠟塊,用切片機制成切片的過程為石蠟切片法。石蠟切片法現使用的切片機有平推式切片機、輪轉式切片機兩種。

一、平推式切片機石蠟切片法

1.切片前的準備:清洗過的載物片(或免清洗的),毛筆,鉛筆,小竹片,水槽,霧化器,攤片器,切片刀,刀架。

2.切片制作步驟:刀架的粗削部放在頭端,在切片機刀架部夾緊。組織蠟塊裝在切片機蠟塊固定器上夾緊。右手握切片機刀頭運動手柄,左手轉動切片機蠟塊運動 旋鈕。先轉動此鈕,后平拉刀架運動手柄,進行粗削,直至組織切全。停止,將刀架移到細削部,輕輕轉動蠟塊運動旋鈕,后拉刀架手柄進行細削。削至組織光滑發 亮,右手拿毛筆掃凈刀架及蠟塊上的蠟屑,組織屑,放下毛筆,再用右手握住刀架運動手柄。左手拿小竹片,用竹片頭蘸一下水槽中的水。左手中指搬動薄切鈕,霧 化器的噴頭對準蠟塊。右手拉刀架運動手柄。左手中的小竹片在蠟塊空白處等待切片刀切起蠟片一端挑起粘住,隨切片刀移動,完整的蠟片切出后,粘在竹片上,移 入水槽中,撈片,放在攤片器上攤片5 min后,裝在染色籃上,放入75℃烤箱烤片。

3.注意事項

(1)無冷臺的病理科可以將包埋好的組織蠟塊放到冰箱內,但如放置時間過久溫度太低切片時蠟塊會產生熱漲,切片會厚,要多切幾張,后面的片子就會薄一些。

(2)霧化器是去除靜電的,但也有增加切片厚度的缺陷。尤其霧氣大時,使蠟塊熱漲,厚度增加更明顯。為了保證切片厚度,一定要控制好風力、霧力。霧化器使用自來水,水位控制在30刻度。

(3)切片機使用前一定要檢查各部位情況。先檢查固定器是否固定在你所要的厚度上。切片機刀架角度與蠟塊呈90。。從蠟塊右上角進刀。

二、輪轉式切片機石蠟切片法

1.切片前的準備:清洗過的載玻片、毛筆、鉛筆、盛有30%乙醇的小燒杯、牙科鑷、展片槽、切片機、一次性刀片及刀架。檢查輪轉式切片機切片厚度的鈕是否固定于你所要切的厚度刻度上。

2.切片制作步驟:將放在-5℃冷臺上的組織蠟塊裝在切片機固定器上夾緊,空白蠟多的一端在上。將切片刀固定一端為粗削部,左手旋動蠟塊推動器,右手旋動 切片機把手。先搖動蠟塊推動器,后搖動切片機機頭半輪上下運動,進行粗削,一進一削,直至組織切全。而后將切片刀移至另一端進行細削,削至蠟塊光滑平整。 用毛筆將其刀架、蠟塊面清掃干凈。左手持毛筆,右手整輪轉動切片機手柄進行切片。將毛筆貼于刀架背不時轉動,輕輕托起連片的蠟片。右手停止轉動機頭,換持 牙科鑷,夾住連片蠟片頭端,放入盛30%乙醇的燒杯內。用牙科鑷去除不好的蠟片。放入水溫45~50℃水槽內展片后撈片。

3.注意事項

(1)無冷臺的病理科可以將包埋好的組織蠟塊放到冰箱內,但如放置時間久溫度太低注意切片時蠟塊會產生熱漲,切片會厚,要多切幾張,后面的片子就會薄一些。

(2)為了能夠連片,蠟塊兩端要有空白蠟。多的一端放在上面。

(3)展片槽溫度不要過高,有時會有小組織塊散漂在水面上造成污染??捎檬旨堈鄢膳c水槽寬度相同水面行走,將組織屑撈走。

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