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南京科捷檢測科技發展有限公司
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閱讀：3128發布時間：2018-1-30
液相色譜法又稱作高壓液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography），是在經典液相色譜法的基礎上，隨著現代科學技術的發展而發展起來的一種高壓、、高速、高靈敏度的現代化分離方法。由于分離機制的不同，可分為以下幾種類型：液固色譜、液液色譜、離子交換色譜、離子對色譜、親和色譜、電色譜等。由于其在氣相色譜法的基礎上發展起來的，不僅具有氣相色譜的一般優點，還有其自身所*的特點，因此所適用的范圍廣。世界上約有80%的有機化合物可以用HPLC來分析測定。近幾年，液相色譜法現在已經廣泛應用于天然產物、化工、醫藥、生化、環保、農業、食品等科學領域，特別是天然產物的分析和分離。
一、萜類化合物的分析和分離
萜類化合物是廣泛存在于植物和動物體內的天然有機化合物。如從植物中提取的香精油——薄荷油、*等，植物及動物體中的某些色素——胡籮卜素、蝦紅素等等。隨著對萜類化合物的深入研究和不斷的開發利用，其分析方法近年來也在得到快速發展，液相色譜也廣泛應用于萜類化合 物的研究。李赫等采用DiamonsilTM C18色譜柱(250 mm ×416 mm i1d1, 5 µm ) ,以乙腈和乙酸乙酯為流動相進行梯度洗脫，采用二極管陣列檢測器檢測，檢測波長為450 nm，在以上的條件下，建立了不同劑型保健品中類胡蘿卜素的提取方法和同時測定保健品中4種類胡蘿卜素含量的液相色譜分析方法。該法簡便、快速、準確，是保健品中多種類胡蘿卜素定量測定的可靠方法之一。
二、生物堿類化合物的分析和分離
生物堿類是存在于生物體（主要為植物）中的一類含氮的堿性有機化合物，大多數有復雜的環狀結構，氮素多包含在環內，有顯著的生物活性，是中草藥中重要的有效成分之一。在現代的分析手段中，液相法是分析和分離生物堿類化合物的主要手段之一。陳燕方等人選擇十八烷基鍵合相色譜柱，以甲醇-水-氯fang-三乙胺混合溶液為流動相，用液相色譜法測定了一種植物性農yao——0.25 %烏頭總堿乳油中的烏頭生物堿。實驗結果表明中烏tou堿、烏you堿及次烏tou堿與其他雜質能夠得到很好的分離。以安宮黃ti酮作內標物，用峰面積比測定各生物堿含量，在其線性范圍內分析結果準確，回收率高( > 92 %) ，重現性好(RSD < 3.2 %) 。
三、黃酮類化合物的分析和分離
黃酮類化合物是天然產物中非常重要的化合物，迄今為止從天然產物中發現了大量的黃酮類化合物，其中大多數具有顯著的生理藥理活性，在醫藥上已有廣泛的應用。此外黃酮類化合物也是重要的食品添加劑、天然抗氧化劑、天然色素天然甜味劑等 [1、10] 。伴隨著黃酮類化合物的廣泛研究，其分析和分離手段也得到了大大的改進，液相色譜法也廣泛的應用于分析和分離黃酮類化合物。
四、香dou素類化合物的分析和分離
香dou素又稱香豆精，為順式鄰羥基桂皮酸的內酯，具特異香氣，以游離狀態及其苷類存在于生物體內。金米聰等在全血樣品經乙酸乙酯提取后，在XDB C18柱(150 mm ×211 mm , 5µm )上以甲醇-0.2%乙酸水溶液(體積比為88∶12)混合液為流動相，采用熒光變波長程序檢測，同時通過建立各殺鼠劑的熒光光譜庫，利用譜庫檢索，提高定性的準確度。各殺鼠劑的線性范圍為0.01～10.00 mg /L (*為0.05～10.00 mg /L )，檢出限為0.01～0.05 mg /L，方法的加標回收率為81%～98%，其相對標準偏差(RSD )為3.8%～8.5%。建立了同時測定全血中*、殺鼠mi、*、氟鼠靈與溴shu靈等5種香dou素類殺鼠劑的簡便、靈敏、準確的液相色譜-變波長熒光分析方法。該法適用于中毒病人的中毒診斷檢測。
五、皂苷類化合物的分析和分離
目前已知的人參皂苷類成分有30多種。到現在為止，許多研究人參皂苷的研究人員基于不同物質建立了許多方法，而現在比較常用的方法是液相色譜法。潘堅揚等采用Agilent Zorbax SB-C18柱，以乙腈-水-0.05%磷酸為流動相，流速1.5 ml/min，柱溫35℃，檢測波長203 nm。在此色譜條件下，建立可同時測定人參皂苷Rg1、Re、Rf、Rg2、Rb1、Rc、Rb2、Rb3 和Rd含量的反相液相色譜(RP-HPLC)方法。各組分在60 min內均得到較好分離，回收率符合含量測定要求。
六、醌類化合物的分析和分離
醌類化合物是許多中草藥中具有多種生物活性的有效成分，包括苯醌、萘醌、菲醌和蒽醌。其中蒽醌及其衍生物的種類、含量較多，在自然界植物中分布很廣。馬志剛等采用Waters Spherisorb ODS2(5µm ,Φ4. 6mm ×250mm)色譜柱；以體積比為85∶15的甲醇- 0.1%磷酸溶液為流動相；流速為1.5 ml/ min ；柱溫為40℃；檢測波長為430nm的色譜條件下，建立1個同時在10min內有效的分離和測定大黃及其制劑中的蘆薈大黃素、大黃酸和大黃素含量的反相液相色譜法。此方法簡便、快速、靈敏、線性范圍寬，可用于大黃及其制劑中蘆薈大黃素、大黃酸和大黃素的定量測定。
七、甾類化合物的分析和分離
隨著人類對甾類化合物生理機能的認識，該類化合物的研究和應用受到了生物學、醫學、化學等眾學科的關注。有關甾類化合物的多種分析方法，如紫外分光光度法、熒光法、HPLC、放射免疫法、差分脈沖極譜法等已見報道。本文列舉一些液相色譜法在甾類化合物的分析和分離例子。閆素君等從星骨海綿Sletta tenuis Lindgren中分離及鑒定的甾類化合物。其中甾酮3β-羥基-豆甾-5-烯-7-酮、3β-羥基-膽甾-5-烯-7-酮是第1次從該種海綿中由液相色譜分離得到，根據IR、MS、NMR、2D-NMR等波譜數據確定其結構。
液相色譜法是現代分析化學中zui重要的分離方法之一。液相色譜法吸取了氣相色譜和經典液相色譜的優點，而且具有、高速的優點，靈敏度高、樣品用量少，并用現代化的手段加以改進，因此得到了迅猛的發展。20多年來，隨著HPLC技術的不斷進步和完善，它在生化、藥檢、石油化工、環境監測、合成化學、食品衛生等領域的應用越來越廣泛，并且是天然產物研究領域中起至關重要的一種研究手段。近年隨著天然產物研究的深入下去，液相色譜法將有更廣泛的應用前景。
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