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液相色譜儀操作步驟及主要事項

閱讀:22286發布時間:2017-11-24

 

一、液相色譜儀主要操作步驟

1. 過濾流動相,根據需要選擇不同的濾膜。   

2. 對抽濾后的流動相進行超聲脫氣10-20分鐘。  

3. 打開HPLC工作站(包括計算機軟件和色譜儀),連接好流動相管道,連接檢測系統。  

4. 進入HPLC控制界面主菜單,點擊manual,進入手動菜單。   

5. 有一段時間沒用,或者換了新的流動相,需要先沖洗泵和進樣閥。沖洗泵,直接在泵的出水口,用針頭抽取。沖洗進樣閥,需要在manual菜單下,先點擊purge,再點擊start,沖洗時速度不要超過10 ml/min。   

6. 調節流量,初次使用新的流動相,可以先試一下壓力,流速越大,壓力越大,一般不要超過2000。點擊injure,選用合適的流速,點擊on,走基線,觀察基線的情況。   

7. 設計走樣方法。點擊file,選取select users and methods,可以選取現有的各種走樣方法。若需建立一個新的方法,點擊new method。選取需要的配件,包括進樣閥,泵,檢測器等,根據需要而不同。選完后,點擊protocol。一個完整的走樣方法需要包括:a.進樣前的穩流,一般2-5分鐘;b.基線歸零;c.進樣閥的loading-inject轉換;d.走樣時間,隨不同的樣品而不同。   

8. 進樣和進樣后操作。選定走樣方法,點擊start。進樣,所有的樣品均需過濾。方法走完后,點擊postrun,可記錄數據和做標記等。全部樣品走完后,再用上面的方法走一段基線,洗掉剩余物。   

9. 關機時,先關計算機,再關液相色譜。   

10). 填寫登記本,由負責人簽字。

二、液相色譜儀注意事項:

1. 流動相均需色譜純度,水用20M的去離子水。脫氣后的流動相要小心振動盡量不引起氣泡。

2. 柱子是非常脆弱的,*次做的方法,先不要讓液體過柱子。   

3. 所有過柱子的液體均需嚴格的過濾。  

4. 壓力不能太大,不要超過2000 psi

5.  選擇高品質的柱子,并注意使用方法;可以延長柱子的使用壽命。一般認為同一廠牌、同一型號的柱子之間的品質都相同,對品質管理很嚴格的廠家而言,這說法是成立的。但如果廠家品質管理不夠嚴格,即使是同一批號的新柱子之間的品質也有差異。所以,選用柱子時必須選擇管理嚴格的高品質柱子,我們知道,任何柱子使用過后都會產生變化。尤其如在強酸或強堿條件下使用,柱子更易產生變化。因此,應盡量選用pH適用范圍大的柱子。在開發新分析方法時,許多專家建議不要使用舊柱子。因柱子一經使用。柱性會改變;如此一來,使用舊柱子開發出來的新分析方法,很可能在再使用同廠牌的新柱子分析時。發生無法達到預定效果的情況。


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