每孔中先各加入樣品稀釋液100 ul,*孔再加標準品100 ul,混勻后用移液器吸出100 ul,移至第二孔,如此反復作對倍稀釋至第7孔,zui后,ELISA試劑盒從第7孔中吸出100 ul棄去,使之體積均為100 ul。第8孔為空白對照。
1、以上標準孔及待查樣品均建議做復孔,每次測定均要做標準孔。
2、本試劑盒宜置-20 ℃冷藏保存。
3、本小鼠ELISA試劑盒取出的試劑在室溫（20~25 ℃）環(huán)境下使用,溶液應輕輕搖勻后使用。
4、本試劑盒含2M硫酸,不要將它與含*的廢物混在一起。
5、板條開封后剩余板條要再封好,ELISA試劑盒保持板條干燥。
6、避免交叉污染。如洗滌時向樣品待測蛋白含量可能高的一側傾倒。
7、提前24 h打開烤箱預熱。
8、底物工作液應在顯色前5~10 min配制。若配制時間過長,會變質。
9、甩盡孔內液體,每孔加350 ul左右洗滌液,靜止30 s后甩盡。尤其加抗體工作液或底物時盡量弄干孔內液體。ELISA試劑盒且孵育過程中要蓋住各反應孔,防止液體恢復。
10、盡量防止樣品待測蛋白濃度過高而出現酶標儀顯示out。當酶標儀測定值出現許多out時,可通過稀釋一定倍數后用可見光分光計測定,所有孔均同時測定。