污水處理設備 污泥處理設備 水處理過濾器 軟化水設備/除鹽設備 純凈水設備 消毒設備|加藥設備 供水/儲水/集水/排水/輔助 水處理膜 過濾器濾芯 水處理濾料 水處理劑 水處理填料 其它水處理設備
青島捷世康生物科技有限公司
暫無信息 |
閱讀:380發布時間:2016-7-11
重組DNA分子電轉化入宿主細胞
實驗原理
宿主細胞是基因克隆載體的增殖場所,對于一個適當的宿主細胞,具有以下幾個要求:
1、對載體的復制和擴增沒有嚴格的限制。
2、不存在特異的內切酶體系降解載體DNA。
3、載體增殖過程中,不對載體DNA進行修飾。
4、不會生產載體DNA的體內重組。
5、容易導入重組DNA分子。
6、符合“重組DNA操作規則”的安全標準。
現在常規使用的是大腸肝菌XL1-Blue株K12株。本實驗用XL1-Blue株。
試劑和器材
備用平板,冰盒,20uL槍,未開蓋的新槍頭盒。
重組DNA。
氨芐青酶素(AP)。
二甲苯甲酰胺(X-gal 20mg/mL,溶于二甲苯甲酰胺,無須濾過滅菌,分裝小包裝避光貯存于—20℃)。
IPTG。
XL1-Blue電擊細胞。
操作方法
1、鋪備用平板
LB固體培養基200mL,融化后加200uL。→凝固后約半小時,加入X-gal 80uL和IPTG 9uL。→涂布,37℃,約1h。→得備用平板。
2、電擊轉化
電擊法依靠短暫的電擊,促使DNA進入細菌。—70℃冰箱取電擊細胞XL1-Blue,冰上解凍。→取2uL重組DNA或鏈接產物于40uL電擊細胞中,混勻。→在電擊儀上將重組DNA分子轉入XL1-Blue細胞。→恢復生長約半小時。→1200r/min,2~3min。→去掉大部分上清,剩200~300uL,用槍吹打混勻。→涂布備用平板。→37℃,培養過夜。→挑白色菌落。
環保在線 設計制作,未經允許翻錄必究 .? ? ?
請輸入賬號
請輸入密碼
請輸驗證碼
請輸入你感興趣的產品
請簡單描述您的需求
請選擇省份