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技術文章

重組DNA分子電轉化入宿主細胞

閱讀:380發布時間:2016-7-11

重組DNA分子電轉化入宿主細胞

 

實驗原理

宿主細胞是基因克隆載體的增殖場所,對于一個適當的宿主細胞,具有以下幾個要求:

1、對載體的復制和擴增沒有嚴格的限制。

2、不存在特異的內切酶體系降解載體DNA。

3、載體增殖過程中,不對載體DNA進行修飾。

4、不會生產載體DNA的體內重組。

5、容易導入重組DNA分子。

6、符合“重組DNA操作規則”的安全標準。

現在常規使用的是大腸肝菌XL1-Blue株K12株。本實驗用XL1-Blue株。

試劑和器材

備用平板,冰盒,20uL槍,未開蓋的新槍頭盒。

重組DNA。

氨芐青酶素(AP)。

二甲苯甲酰胺(X-gal  20mg/mL,溶于二甲苯甲酰胺,無須濾過滅菌,分裝小包裝避光貯存于—20℃)。

IPTG。

XL1-Blue電擊細胞。

操作方法

1、鋪備用平板

    LB固體培養基200mL,融化后加200uL。→凝固后約半小時,加入X-gal  80uL和IPTG  9uL。→涂布,37℃,約1h。→得備用平板。

2、電擊轉化

    電擊法依靠短暫的電擊,促使DNA進入細菌。—70℃冰箱取電擊細胞XL1-Blue,冰上解凍。→取2uL重組DNA或鏈接產物于40uL電擊細胞中,混勻。→在電擊儀上將重組DNA分子轉入XL1-Blue細胞。→恢復生長約半小時。→1200r/min,2~3min。→去掉大部分上清,剩200~300uL,用槍吹打混勻。→涂布備用平板。→37℃,培養過夜。→挑白色菌落。


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