有些細(xì)胞在血液和組織中的含量很少但卻很重要，比如干細(xì)胞、循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞、循環(huán)腫瘤細(xì)胞和殘留病變細(xì)胞。準(zhǔn)確檢測(cè)和分析這些稀有細(xì)胞，是理解疾病進(jìn)程和發(fā)育機(jī)制的關(guān)鍵。然而稀有細(xì)胞檢測(cè)并不是一件容易的事，會(huì)受到樣本質(zhì)量等多種因素的影響。

流式細(xì)胞技術(shù)能對(duì)每個(gè)細(xì)胞進(jìn)行多種定量分析，是在血液、骨髓等組織中檢測(cè)稀有細(xì)胞的有力工具。稀有細(xì)胞檢測(cè)往往需要大量樣本才能采集到足夠的數(shù)據(jù)，這個(gè)時(shí)候傳統(tǒng)流式細(xì)胞儀也有些發(fā)怵，因?yàn)榇髽颖疽馕吨幚頃r(shí)間長，如果不想犧牲檢測(cè)靈敏度，就不能貿(mào)然加快進(jìn)樣速率。

聲波聚焦技術(shù)，不做任何無謂的犧牲

樣本溶液注射到流式細(xì)胞儀的時(shí)候，細(xì)胞是隨機(jī)分布在三維空間內(nèi)的。讓這些細(xì)胞逐個(gè)穿過激光束，對(duì)于準(zhǔn)確采集數(shù)據(jù)非常重要。絕大多數(shù)流式細(xì)胞儀通過快速流動(dòng)的鞘液實(shí)現(xiàn)這一點(diǎn)。鞘液帶動(dòng)細(xì)胞并將其限制在中心位置，進(jìn)而建立單細(xì)胞流，這一過程稱為水動(dòng)力聚焦。

與傳統(tǒng)水動(dòng)力聚焦不同的是，聲波聚焦技術(shù)利用超聲波將細(xì)胞緊密聚集在樣本流中間，匯聚成一條直線。這種超聲波大于2 MHz，與醫(yī)學(xué)成像中的超聲波類似。聲波聚焦流式細(xì)胞儀基本不受進(jìn)樣速率的影響，能使細(xì)胞強(qiáng)聚焦于激光檢測(cè)點(diǎn)，與樣本-鞘液的比率無關(guān)。

不犧牲通量和精度

傳統(tǒng)的水動(dòng)力聚焦技術(shù)受到了不少限制。流速提高會(huì)增大樣本流的寬度，使細(xì)胞的聚焦效果下降。細(xì)胞偏離激光中心越遠(yuǎn)，激發(fā)光強(qiáng)度變化就越大，CV值也越高。研究人員經(jīng)常需要在分析通量和精度之間尋求平衡。

聲波聚焦技術(shù)在很大程度上與進(jìn)樣流速無關(guān)，不論樣本流與鞘液流的比例如何，都能使細(xì)胞緊密地聚集于激光檢測(cè)焦點(diǎn)，避免分散。這樣可以采集更多光子，在*的樣本通量下保證高精度分析。

聲波聚焦流式細(xì)胞儀在高達(dá)1 mL/min的進(jìn)樣速率下也能維持聚焦，讓研究人員能夠獲得更小的CV值，更好地鑒別弱陽性信號(hào)和背景，實(shí)現(xiàn)更小的差異和更好的信號(hào)分離。

不犧牲檢測(cè)速度

稀有細(xì)胞檢測(cè)一般需要采集大量細(xì)胞，才能獲得準(zhǔn)確而可靠的結(jié)果。在這種情況下，傳統(tǒng)流式細(xì)胞儀需要很長的處理時(shí)間。不過，聲波聚焦流式細(xì)胞儀的樣本運(yùn)行速率非常快（可達(dá)1,000 μL /min），每次運(yùn)行可采集2000萬個(gè)細(xì)胞。這么高的樣本采集速率和樣本量可以幫助人們快速準(zhǔn)確地檢測(cè)稀有細(xì)胞，不會(huì)影響數(shù)據(jù)的質(zhì)量。

不犧牲珍貴樣本

樣本制備對(duì)稀有細(xì)胞檢測(cè)有很大的影響。舉例來說，洗脫和裂解紅細(xì)胞(RBC)會(huì)造成嚴(yán)重的細(xì)胞損失和損傷。聲波聚焦流式細(xì)胞儀支持無洗脫、無裂解的流式實(shí)驗(yàn)方案，可以zui大程度的保留珍貴樣本，避免不必要的細(xì)胞損失，簡化樣本制備步驟。

研究人員可以通過有目的地稀釋樣本來取代洗脫和裂解步驟，快速而有效地分析濃度較低的樣本，比如腦脊液(CSF)、干細(xì)胞以及細(xì)胞數(shù)量較少的稀釋樣本。對(duì)于小鼠血液、骨髓等難以采集的樣本、細(xì)針抽吸樣本或低細(xì)胞產(chǎn)量樣本，研究人員可以直接染色和稀釋，無需洗脫或紅細(xì)胞裂解。

值得一提的是，聲波聚焦流式細(xì)胞儀處理全血樣本可省去樣本制備，既沒有樣本損失，也不會(huì)影響數(shù)據(jù)質(zhì)量。

選擇流式細(xì)胞儀需要知道的事

近三十年來，流式細(xì)胞儀已經(jīng)成為科研和臨床領(lǐng)域*的重要工具。不論你是不是*次購買流式細(xì)胞儀，入手一個(gè)新平臺(tái)都需要考慮很多因素。

流式細(xì)胞儀主要由三個(gè)部分組成：液流系統(tǒng)、光學(xué)系統(tǒng)和電子系統(tǒng)。液流系統(tǒng)將顆粒或細(xì)胞送給激光束進(jìn)行檢測(cè)。光學(xué)系統(tǒng)負(fù)責(zé)照明并將光信號(hào)引導(dǎo)到適當(dāng)?shù)臋z測(cè)器。而電子系統(tǒng)將光信號(hào)轉(zhuǎn)變?yōu)殡娔X可以處理的電信號(hào)。

檢測(cè)參數(shù)

同時(shí)檢測(cè)多種細(xì)胞參數(shù)，是流式細(xì)胞儀的一大優(yōu)勢(shì)。我們?cè)谶x擇流式細(xì)胞儀時(shí)一定要明確自己對(duì)參數(shù)的需求。因?yàn)橐淮螌?shí)驗(yàn)?zāi)軝z測(cè)多少參數(shù)，取決于流式細(xì)胞儀配備的激光器和檢測(cè)器。比如Attune®NxT聲波聚焦流式細(xì)胞儀采用模塊化設(shè)計(jì)，能夠配置多達(dá)4種激光和14色熒光檢測(cè)，適用于多參數(shù)分析。

檢測(cè)性能

了解流式細(xì)胞儀的靈敏度、分辨率、動(dòng)態(tài)范圍、檢測(cè)能力和檢測(cè)速度，可以幫助我們縮小選擇范圍。購買流式細(xì)胞儀是一筆不小的投資，我們不僅需要認(rèn)清目前的研究需求，還應(yīng)全面考慮到未來幾年的應(yīng)用。

樣本類型

現(xiàn)在絕大多數(shù)流式細(xì)胞儀都能處理幾微升到幾百微升的樣本。如果細(xì)胞非常，我們就需加大樣本量同時(shí)盡量避免細(xì)胞損失。在這種情況下，Attune®NxT聲波聚焦流式細(xì)胞儀將是不錯(cuò)的選擇。這種流式細(xì)胞儀特別適用于細(xì)胞和珍貴樣本的檢測(cè)。

系統(tǒng)軟件

流式細(xì)胞儀用起來順不順手，在很大程度上取決于其系統(tǒng)軟件。除了方便性以外，我們還需要了解軟件是否能呈現(xiàn)我們所需的數(shù)據(jù)，以及可不可以定時(shí)更新升級(jí)。Attune的采集和分析軟件很直觀而且功能強(qiáng)大，適合各種經(jīng)驗(yàn)水平的用戶。

實(shí)驗(yàn)室空間

每一個(gè)實(shí)驗(yàn)室的空間都是有限的，越來越緊湊正是流式細(xì)胞儀的發(fā)展趨勢(shì)。Attune聲波聚焦流式細(xì)胞儀就是這樣一種小巧方便的臺(tái)式設(shè)備。

除此之外，購買流式細(xì)胞儀之前我們還需要了解多方面的信息，比如儀器的自動(dòng)化程度，廠家提供的和培訓(xùn)，儀器的兼容性和可拓展性等等。