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江蘇晶美生物科技有限公司

進口elisa試劑盒的制備

時間:2016-12-16閱讀:303
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試劑盒組成

 

1

30倍濃縮洗滌液20ml×1瓶

7

終止液6ml×1瓶

2

酶標試劑6ml×1瓶

8

標準品(3200μmol/L)0.5ml×1瓶

3

酶標包被板12孔×8條

9

標準品稀釋液1.5ml×1瓶

4

樣品稀釋液6ml×1瓶

10

說明書1份

5

顯色劑A液6ml×1瓶

11

封板膜2張 

6

顯色劑B液6ml×1/瓶

12

密封袋1個

 

標本要求

1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

1.         標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

 

1600μmol/L5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
800μmol/L4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
400μmol/L3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
200μmol/L2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
100μmol/L1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

2.         加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  

4.         配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

6.         加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7.         溫育:操作同3。

8.         洗滌:操作同5。

9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11.     測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

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