一、點板
加樣過程中的注意事項
加樣的過程中漏加或者重加;
加樣的過程中忘記更換吸頭;
樣本的重加或者漏加;
忘記記錄樣本的加樣順序
加樣應用微量移液器(加樣*)按規定的量加入微孔板的1/3處避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產生氣泡。
在實際點樣過程中,提倡用“重復移液法",用這種方式,有如下幾種好處
加樣過程中在板空內不出現或者很少出現氣泡
提高加樣速度,縮短前后樣本反應的時間差
常見的洗板方式
洗板機洗板;
多道孔加樣器洗板
多孔吸頭洗板
在洗板的過程中,確保每孔所加洗滌液量的均一,按說明書操作,不可過多,避免溢出板孔,污染其它樣本,過少,則達不到洗滌的效果,容易出現曲線不成線性,花板等情況。
二、洗板:
洗板機洗板
洗板機洗板一定要預先把板架放平,使洗板機上的每個放液和吸液纖孔都能一致地插入孔底,將孔內液體全部吸干,同時要設置一定的浸泡時間。如出現機洗后拍板有較多殘留液時應再用手工洗2次以上。關機前要用蒸溜水沖洗管道,避免堵孔
手工洗滌
手工洗滌一般采用多道孔加樣器進行洗板,注意要*行吸頭的篩選,防止出現*頭安放不牢的現象。
ELISA是靠洗滌來達到分離結合與未結合抗原抗體復合物及酶標記物的目的,同時洗滌也可將非特異吸附的干擾物質清除掉。
三、甩板
快速甩盡板孔內的液體。防止板孔里的液體對流或反濺回板孔中產生交叉污染。
四、拍板
輕輕的在吸水紙上扣干板孔內的液體,而且吸水紙只能使用一次
五、顯色
值得注意的是,并非試劑盒中所規定的顯色時間是的,因為試劑盒的吸光度值會受環境中的溫度、濕度、酶標板反應時所接觸到的物品的導熱度等有關,實驗操作人員在加完顯色液后,可根據顏色的深淺適當的延長或者縮短顯色時間。防止出現吸光值接近或高于酶標儀的zui高檢測靈敏度(OD值在2.5-3.0之間),這樣會間接影響到檢測結果,如出現曲線前半部份梯度不明顯或顛倒數值等現象,也就造成了一些假陽性或部份檢測結果偏低的現象。
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