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閱讀:253發(fā)布時(shí)間:2015-6-3
用一定的介質(zhì)在離心管內(nèi)形成一連續(xù)或不連續(xù)的密度梯度,將細(xì)胞混懸液或勻漿置于介質(zhì)的頂部,通過重力或離心力場的作用使細(xì)胞分層、分離。這類分離又可分為速度沉降和等密度沉降平衡兩種(圖2-23)。密度梯度離心常用的介質(zhì)為氯化銫,蔗糖和多聚蔗糖。分離活細(xì)胞的介質(zhì)要求:1能產(chǎn)生密度梯度,且密度高時(shí),粘度不高;2PH中性或易調(diào)為中性;3濃度大時(shí)滲透壓不大;4)對細(xì)胞無毒。
速度沉降(velocity sedimentation)主要用于分離密度相近而大小不等的細(xì)胞或細(xì)胞器。這種降方法所采用的介質(zhì)密度較低,介質(zhì)的zui大密度應(yīng)小于被分離生物顆粒的zui小密度。
生物顆粒(細(xì)胞或細(xì)器)在十分平緩的密度梯度介質(zhì)中按各自的沉降系數(shù)以不同的速度沉降而達(dá)到分離。
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