ELISA試劑盒與細胞培養(yǎng)實驗關系
ELISA試劑盒不論是哪一種實驗，從試劑到操作，溫度都是其中的一個要點。今天信然教您如何掌握好細胞培養(yǎng)溫度，能干使得實驗又上一層樓哦！
ELISA試劑盒高溫對細胞培養(yǎng)不利。高溫主要引起酶的滅活、類脂質破壞、核分裂的破壞。產(chǎn)生凝固酶使細胞發(fā)生凝固，使蛋白質變性，體外培養(yǎng)細胞時一定要避免高溫。一般哺乳類及禽類細胞體外培養(yǎng)的適宜溫度是37~38℃，細胞耐受低溫的能力比抗熱的能力強，ELISA試劑盒在低溫下的代謝活力及核分裂降低。溫度低于0℃時會影響細胞代謝，但并無傷害作用。置于23~25℃（魚類細胞適宜）時仍能生存和生長，但速度減緩。
從以上的介紹中能夠看出，細胞的培養(yǎng)溫度不能過高或者過低，保持在一個良好的溫度之下。
ELISA試劑盒測抗原常用方法操作步驟
1 將特異性抗體與固相載體聯(lián)結，形成固相抗體。洗滌除去未結合的抗體及雜質。
2 加受檢標本，保溫反應。標本中的抗原與固相抗體結合，形成固相抗原抗體復合物。 洗滌除去其他未結合物質。
3 加酶標抗體，保溫反應。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。*洗滌未結合 的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢抗原的量相關。
4 加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。通過比色，測知標本中抗原的量。在臨床檢驗中，此法適用于檢驗各種蛋白質等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要獲得針對受檢抗原的異性抗體，就可用于包被固相載體和制備酶結合物而建立此法。如抗體的來源為抗血清，包被和酶標用的抗體分別取自不同種屬的動物。如應用單克隆抗體，一般選擇兩個針對抗原上不同決定簇的單抗，分別用于包被固相載體和制備酶結合物。這種雙位點夾心法具有很高的特異性，而且可以將受檢標本和酶標抗體一起保溫反應，作一步檢測。
在一步法測定中，當標本中受檢抗原的含量很高時，過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合，而不再形成"夾心復合物"。類同于沉淀反應中抗原過剩的后帶現(xiàn)象，此時反應后顯色的吸光值（位于抗原過剩帶上）與標準曲線（位于抗體過剩帶上）某一抗原濃度的吸光值相同（參見1.3.2，圖1-4），如按常法測讀，所得結果將低于實際的含量，這種現(xiàn)象被稱為鉤狀效應（hook effect），因為標準曲線到達高峰后呈鉤狀彎落。鉤狀效應嚴重時，反應甚至可不顯色而出現(xiàn)假陰性結果。因此在使用一步法試劑測定標本中含量可異常增高的物質（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）時，應注意可測范圍的zui高值。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應。
假使在被測分子的不同位點上含有多個相同的決定簇，例如HBsAg的a決定簇，也可用針對此決定的同一單抗分別包被固相和制備酶結合物。但在HBsAg的檢測中應注意亞型問題，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4個亞型，雖然每種亞型均有相同的a決定簇的反應性，這也是用單抗作夾心法應注意的問題。雙抗體夾心法適用于測定二價或二價以上的大分子抗原，但不適用于測定半抗原及小分子單價抗原，因其不能形成兩位點夾心。
