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ELISA試劑盒實驗應對方法

閱讀:811發布時間:2014-12-3

    我們必須對影響ELISA試劑盒實驗結果各因素有一定的認識。的 試劑 ,良好的儀器和正確的操作是保證ELISA試劑盒檢測結果準確可靠的必要條件。如不注意,就易出現白板、花板、色弱和假陽性等現象。尤其是花板現象(就是空白、陰性、陽性對照以及室內質控孔結果正常,而標本孔的OD值卻明顯偏高)是各個廠家洗板機調試中經常遇到的問題。現將ELISA試劑盒實驗操作中注意事項總結如下,以期給大家帶來一些啟發,以改善洗板機的安裝調試水平,提高臨床檢測質量。

    ELISA試劑盒診斷試劑經歷了從合成肽向基因工程抗原的過渡。由于歷史的原因,人們往往以反應本底的好壞來衡量ELISA試劑盒,因此有些廠家為了保持較好的本底采用了單片段基因工程抗原及合成肽包被,該類試劑盒的流行病學敏感度不夠,穩定性也成問題。也有廠家堅持試劑盒高的流行病學敏感度,科學地對待反應結果。基因工程抗原較合成肽抗原有*的*性,就HCV-ELISA 試劑盒來講,*代產品為合成肽抗原,主要是HCV特異性抗原決定簇的肽片段;第二代產品包被的抗原既有基因工程抗原又有合成肽,只是當時的基因工程抗原不全,僅包括了HCV 的核心區片段;第三代產品基本上采用了基因工程抗原,而且這些抗原包括更多、更穩定、純度更高的HCV 特異性抗原。第三代 試劑 的敏感度大大提高了。基因工程抗原與合成肽抗原的區別如下:

    ELISA試劑盒基因工程抗原是抗原基因在質粒載體中原核或真核表達的蛋白質抗原,多以大腸桿菌或酵母菌為表達系統。該類抗原與合成肽相比具有以下特點:

a.分子量大。合成肽采用化學方法制備,由于工藝的局限,合成數量有限,只能達到數百個氨基酸;而利用基因工程制備的抗原,分子量更大。

b.穩定性好。包被的抗原的穩定性可使ELISA試劑盒的效期得到保證,早期以合成肽為包被抗原的 試劑 盒效期只有3-4 個月,采用基因工程抗原后效期大大延長了。

c.基因工程抗原將特異性抗原決定簇基因融合表達,表達產物包含更多的抗原決定簇,可提高 試劑 盒的靈敏度,提高檢出率。


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