本試劑盒僅供科研使用，定量檢測細(xì)胞液、體液、組織、血清、血漿等標(biāo)本中人表皮生長因子(EGF)的含量。 原理: 采用雙抗體夾心法測定人表皮生長因子(EGF)水平。用純化的人表皮生長因子(EGF)抗體包被微孔板，制成固相載體，實驗時 依次在微孔板中加入樣本及標(biāo)準(zhǔn)品，并加入 HRP 標(biāo)記的表皮人表皮生長因子Elisa 試劑盒生長因子(EGF)抗體，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，反復(fù)洗滌 后加底物 TMB 顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色，再用硫酸終止反應(yīng)，轉(zhuǎn)變成黃色。顏色的深淺和樣品中的表 皮生長因子(EGF)含量呈正相關(guān)。采用酶標(biāo)儀在 450nm 波長測定吸光度（OD 值），根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算測試樣品中表皮生長 因子(EGF)濃度。 試劑盒組成 序號 名稱 規(guī)格 1 酶標(biāo)包被板 96 孔*1 可拆卸板 2 酶標(biāo)試劑 6ml*1 瓶 3 標(biāo)準(zhǔn)品(濃度 960pg/ml) 0.6ml*1 瓶 4 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 2ml*1 瓶 5 *標(biāo)記的抗 EGF 抗體 1.5ml*1 瓶 6 顯色劑 A 液 6ml*1 瓶 7 顯色劑 B 液 6ml*1 瓶 8 終止液 6ml*1 瓶 9 濃縮洗滌液（*30） 20ml*1 瓶 10 封板膜 1 張 11 人表皮生長因子Elisa 試劑盒使用說明書 1 份 實驗材料與試劑配制： 1. 儀器與材料：酶標(biāo)儀（使用前預(yù)熱30分鐘），微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水，濾紙。 2. 洗液的配制：按1:30的比例配制洗液備用。 樣品收集、處理及保存 1. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：適用于檢測體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份。用無菌管收集細(xì)胞上清液，以1000×g離心15分鐘，收集上清。 2. 細(xì)胞：用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞3次，調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到104-106 /ml 左右，通過反復(fù)凍融，使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份，或 者細(xì)胞超聲粉碎，離心取上清液檢測。 3. 血清：在室溫下，血液自然凝固，以1000×g離心15分鐘，取上清待測。 4. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后靜置10-20 分鐘后，以1000×g離心15分鐘，收集上 清。 5. 體液：包括胸腹水、腦脊液，分泌物等。使用不含熱原人表皮生長因子Elisa 試劑盒和內(nèi)毒素的離心管收集，以1000×g離心15分鐘，收集上清。 6. 組織標(biāo)本：切取組織標(biāo)本，稱取重量0.5mg，加入500ul 的PBS，用手工或勻漿器，或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿，以2000-3000 rmp離心20 分鐘，收集上清進(jìn)行檢測。 7. 樣品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 8. 保存：如果樣品不能立即檢測，應(yīng)將其分裝，-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。血液標(biāo) 本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解 凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
