用純化的REG-4抗體包被微孔板，制成固相載體，往微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、*化的REG-4抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過*洗滌后用底物（TMB）顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的REG-4呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（ 值），計算樣品濃度。
大鼠胱硫醚β-合成酶ELISA試劑盒請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 ng/ml，然后做系列倍比稀釋分別配制成200 ng/ml，100 ng/ml，50 ng/ml，25 ng/ml，12.5 ng/ml，6.25 ng/ml，3.12 ng/ml，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 ng/ml。如配制100 ng/ml標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5ml （不要少于0.5ml ）200 ng/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
1、 酶標(biāo)儀（建議儀器使用前提前預(yù)熱）
2、 微量加液器及吸頭，EP管
3、 蒸餾水或去離子水，濾紙
1、 血清：全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4 過夜后于1000 g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20或-80 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2、 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于 1000 g離心15分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨?/span>置于-20 或-80 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3、 其它生物標(biāo)本：請1000 g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20 或-80 保 存，大鼠胱硫醚β-合成酶ELISA試劑盒但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
實驗開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫，試劑不能直接在37 溶解；試劑或樣品配制時，均需充分混勻，混勻時盡量避免起泡。計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1、 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?nbsp;100 ，余孔分別加或待測樣品100 ，注意不要有氣泡，加樣 時將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37溫育2小時。
2、 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加 100 （臨用前配制），酶標(biāo)板加上覆膜，37 溫育1小時。
3、 棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400 /每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。
4、 每孔加（臨用前配制）100 ，加上覆膜，37 溫育1小時。
5、 棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，方法同步驟3。
6、 每孔加，酶標(biāo)板加上覆膜（反應(yīng)時間控制在15-30分鐘，當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯時，即可終止）。
7、 每孔加50 ，終止反應(yīng)，此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物 液的加入順序相同。
8、 立即用酶標(biāo)儀在450nm波長測量各孔的光密度（ 值）。
加樣或加試劑時，*個孔與zui后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的 “預(yù)溫育”時間，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時間（包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品）控制在10分鐘內(nèi)。*設(shè)置復(fù)孔進行實驗。
為防止樣品蒸發(fā)，實驗時將加上蓋或覆膜的酶標(biāo)板置于濕盒內(nèi)，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進行下步操作，任何時侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài)；同時應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的溫育時間和溫度。
4洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響zui后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、工作液工作液請依據(jù)所需的量配制使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請配制標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配制（如吸取時，一次不要小于10 ），以避免由于不準(zhǔn)確稀 釋而造成濃度誤差；請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、工作液、工作液。
6、 加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化（比如，每隔10分鐘），如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7、底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
1、 手工洗板方法：將*的洗滌緩沖液至少0.4ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘，吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體，在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全面的鑒定與分析，
大鼠胱硫醚β-合成酶ELISA試劑盒產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險。
2、 zui終的實驗結(jié)果與試劑的有效性、實驗者的相關(guān)操作以及當(dāng)時的實驗環(huán)境密切相關(guān)，請務(wù)必
準(zhǔn)備充足的標(biāo)本備份。
3、 只有全部使用、試劑才能保證檢測效果，因為所有試劑都是有關(guān)聯(lián)的，不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴(yán)格遵守試劑的實驗說明才會得到的檢測結(jié)果。
4、 在儲存及溫育過程中避免將試劑暴露在強光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和微生物的 污染，因為蛋白水解酶的干擾將導(dǎo)致出現(xiàn)錯誤的結(jié)果。
5、 試劑盒保存：請收到試劑盒后盡快將標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A和檢測溶液B保存于-20 ，其余試劑短期保存請置于4 ，*保存則置于-20 。開封后的酶標(biāo)板要密封加干燥劑后保存于-20 ，避免潮濕。
6、 濃洗滌液會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。
7、 剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會有少許水樣物質(zhì)，此為正常現(xiàn)象，不會對實驗結(jié)果造成任何影響。
8、 有效期：6個月。
