的ELISA試劑盒，杰出的儀器和正確的操作是確保ELISA檢測成果準確牢靠的必要條件。ELISA的操作因固相載體的構成不同而有所差異，國內醫學查驗一般均用板式點。
洗刷在ELISA進程中雖不是一個反響進程，但卻也決議著實驗的成敗。ELSIA就是靠洗刷來到達別離游離的和結合的酶符號物的意圖。經過洗刷以鏟除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結合的物質，以及在反響進程中非特異性地吸附于固相載體的攪擾物質。聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的，而在洗刷時又應把這種非特異性吸附的攪擾物質洗刷下來。可以說在ELISA操作中，洗刷是zui主要的關鍵技術，應引起操作者的高度重視，操作者應嚴厲按要求洗刷，不得馬虎。
一般說來，ELISA試劑盒在5天內測定的血清標本可放置于4℃，超越一周測定的需低溫冰存。凍住血清融解后，蛋白質部分濃縮，散布不均，應充沛混勻宜輕緩，防止氣泡，可上下顛倒混和，不要在混勻器上激烈振動。混濁或有沉積的血清標本應先離心或過濾，弄清后再檢測。反復凍融會使抗體效價下跌，所以測抗體的血清標本如需保存作屢次檢測，宜少量分裝冰存。保存血清自收集時就應留意無菌操作，也可參加適當防腐劑試劑的預備按試劑盒說明書的要求預備實驗中需用的試劑。ELISA中用的蒸餾水或去離子水，包含用于洗刷的，應為新鮮的和高質量的。自配的緩沖液使用pH計丈量較正。從冰箱中取出的實驗用試劑應待溫度與室溫平衡后運用。試劑盒中本次實驗不需用的部分應及時放回冰箱保存。
在ELISA中一般有3次加樣步聚，即加標本，加酶結合物，加底物。加樣時應將所加物加在LEISA板孔的底部，防止加在孔壁上部，并留意不行濺起，不行發作氣泡。加標本一般用微量加樣器，按規則的量參加板孔中。每次加標本應更換吸嘴，避免發作穿插污染，也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測定（如間接法ELISA）需用稀釋的血清，可在試管中按規則的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中參加稀釋液，再在其間參加血清標本，然后在微型震動器上震動1分鐘以確保混和。加酶結合物使用液和底物使用液時可用定量多道加液器，使加液進程迅速完結。在ELISA中一般有兩次抗原抗體反響，即加標本和加酶結合物后。抗原抗體反響的完結需要有一定的溫度和時刻，這一保溫進程稱為溫育（incubation），有人稱之為孵育，在ELISA中似不恰當。ELISA屬固相免疫測定，抗原、抗體的結合只在固相表面上發作。以抗體包被的夾心法為例，參加板孔中的標本，其間的抗原并不是都有平等的和固相抗結合的機會，只要zui靠近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體觸摸。這是一個逐漸平衡的進程，因而需經分散才干到達反響的結尾。在這以后參加的酶符號抗體與固相抗原的結合也相同如此。這就是為什么ELISA反響總是需要一定時刻的溫育。溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫文4℃（冰箱溫度）等。37℃是實驗室中常用的保溫溫度，也是大多數抗原抗體結合的適宜溫度。
在樹立ELISA試劑盒方法作反響動力學研討時，實驗標明，兩次抗原抗體反響一般在37℃經1-2小時，產物的生成可達高峰。為加快反響，可進步反響的溫度，有些實驗在43℃進行，但不宜選用更高的溫度。抗原抗體反響4℃更為*，在放射免疫測定中多使反響在冰箱中，以構成zui多的沉積。但因所需時刻太長，在ELISA中一般不予選用。
