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ELISA方法的首要操作程序

閱讀:238發布時間:2017-9-18

ELISA方法的首要操作程序為:
(1)載體膜的預處理及抗原包被 取硝酸纖維素膜用蒸餾水浸泡后,稍加單調進行壓圈。將陰性、陽性抗原及被檢查抗原適度稀釋后參加圈中,置37℃使硝酸纖維素膜*單調。每張7cm×2.3cm的膜一般可點加40-53個樣品,每個壓圈可加抗原液1-20μl。
(2) 加酶標抗體,37℃反響必定時刻后,用洗刷液洗三次。
(3)顯色參加新鮮制作的底物液,37℃反響必定時刻后,去掉底物液,加蒸餾水洗刷間斷反響。
(4) 封閉 將硝酸纖維素膜置于封閉液中,37℃感作15-30分鐘。封閉液多選用富含正常動物血清、pH7.2或pH7.4的PBS。
(5) 加被檢血清 可直接在抗原圈上加,也可剪下抗原圈、置于微量板孔中,再參加必定量適度稀釋的待檢血清,37℃反響必定時刻,用洗刷液洗三次,每次1-3分鐘。洗刷液一般為必定濃度的PBS-Tween溶液。
(6) 作用斷定 以陽性、陰惡血清作為對照,膜片基地呈現深棕赤色斑駁者為陽性反響,否則為陰性反響。

 


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