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試驗室細胞搜集的具體辦法過程

閱讀:206發布時間:2017-9-11

試驗室細胞搜集的具體辦法過程,試驗室搜集細胞,關于細胞的研討極為重要,如何搜集細胞成為試驗室的必做項目之一,那么下面上海紀寧的博士就帶大家一同來了解下以下三種辦法:

WB搜集細胞:
將細胞培養基棄掉,用PBS清洗兩次,運用*消化細胞或細胞刮,將細胞懸濁液離心1000rpm/5min,棄上清,保存底層細胞。如要裂解細胞6孔板(99ulRIPA+1ulPMSF),細胞培養皿(198ulRIPA+2ulPMSF),若要做磷酸化蛋白則加如1ul按捺磷酸化蛋白降解按捺劑,參加細胞裂解液后用移液器將細胞吹勻,冰上靜置5min,離心4℃ 12500g/5min,汲取上清液,置于-80℃冰箱;若不裂解細胞,將細胞置于-80℃冰箱。

一般PCR搜集細胞:
將細胞培養基棄掉,用PBS清洗兩次,運用*消化細胞或細胞刮,將細胞懸濁液離心1000rpm/5min,棄上清,保存底層細胞。將細胞置于-20℃冰箱。

qRT-PCR搜集細胞:
將細胞培養基棄掉,用PBS清洗兩次,運用*消化細胞或細胞刮,將細胞懸濁液離心1000rpm/5min,棄上清,保存底層細胞。參加1ml TRIZOL,置于-80℃冰箱。(留意:本試驗需運用耗材和試劑都為無RNA酶,PBS有必要高壓,離心管和槍頭有必要無酶


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