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閱讀:219發布時間:2017-8-10
ELISA試劑盒的成果斷定分為定性和定量兩種 ,在間接法和夾心法ELSIA中,陽性孔呈色深于陰性孔。在競賽法ELISA中則相反,陰性孔呈色深于陽性孔。那么兩類成果怎么判別呢?南京森貝伽生物技術為您解析:
(1)間接法和夾心法
這類反響的定性成果能夠用肉眼判別。目視標本也無色或近于無色者判為陰性,顯色清晰者為陽性。但在ELSIA中,正常人血清反響后常可呈現呈色的本底,此本底的深淺因試劑的構成和試驗的條件不一樣而異,因而試驗中有必要加測陰性對照。陰性對照的構成應為不含受檢物的正常血清或類似物。在用肉眼判別成果時,更宜用顯色深于陰性對照作為標本陽性的目標。
目視法簡捷明晰,但頗具主觀性。在條件許可下,應該用比色計測定吸光值,這么能夠得到客觀的數據。先讀出標本(sample,S)、陽性對照(P)、和陰性對照(N)的吸光值,然后進行核算。核算方法有多種,大致可分為陽性斷定值法和標本與陰性對照比值法兩類。
ELISA試劑盒陽性斷定值
陽性斷定值(cut-off value)通常為陰性對照A值加上一個特定的常數,以此作為判別成果陽性或陰性的規范。
用此法判別成果請求試驗條件非常穩定,試劑的制備有必要規范化,陽性和陰性的對照品應契合一定的規格,須配用精細的儀器,并嚴厲按規則操作。陽性斷定值公式中的常數是在這特定的體系中經過對很多標本的試驗檢查而得到的。現舉某種檢查HBsAg的試劑盒為例。ELISA檢查試劑盒試劑盒中的陰性對照品為不含HBsAg的復鈣人血漿,陽性對照品HBsAg的含量標明為P=9±2ng/ml。每次試驗設2個陽性對照和3個陰性對照。測得A值后,先核算陰性對照A值的平均數(NCX)和陽性對照A值的平均數(PCX),兩個平均數的差(P-N)有必要大于一個特定的數值(例0.400),試驗才有用。3個陰性對照A值均應≥0.5×NCX,并≤1.5×NCX,如其中之一超出此規模,則棄去,而已另兩個陰性對照從頭核算NCX;如有兩個陰性對照A值超出以上規模,則該次試驗無效。陽性斷定值按下式核算:陽性斷定值=NCX+0.05,標本A值>陽性斷定值的為陽性,小于陽性斷定值的為陰性。應留意的是,式中0.05為該試劑盒的常數,只適合于該特定條件下,而不是對各種試劑均可通用。
依據以上敘說能夠看出,在這種方法中陰性對照和陽性對照也起到試驗的質控作用,試劑蛻變和操作不當均會發生"試驗無效"的成果。
b.標本/陰性對照比值
ELISA試劑盒試驗條件(包含試劑)較難保證穩定的情況下,ELISA試劑盒這種判別法較為適宜。在得出標本(S)和陰性對照(N)的A值后,核算S/N值。也有寫作P/N的,這里的P不代表陽性(positive),而是患者(patient)的縮寫,不該誤解。為防止混雜,更宜用S/N表明。
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