（1） 顯色
顯色是ELISA中的終究一步溫育反響，此刻酶催化無(wú)色的底物生成有色的產(chǎn)品。反響的溫度和時(shí)刻仍是影響顯色的要素。在必定時(shí)刻內(nèi)，陰性孔可堅(jiān)持無(wú)色，而陽(yáng)性孔則隨時(shí)刻的延伸而呈色加強(qiáng)。恰當(dāng)進(jìn)步溫度有助于加快顯色進(jìn)行。在定量測(cè)定中，參加底物后的反響溫度和時(shí)刻應(yīng)按規(guī)則力求準(zhǔn)確。定性測(cè)定的顯色可在室溫進(jìn)行，時(shí)刻通常不需要嚴(yán)格控制，有時(shí)可根據(jù)陽(yáng)性對(duì)照孔和陰性對(duì)照孔的顯況恰當(dāng)縮短或延伸反響時(shí)刻，及時(shí)判別。
OPD底物顯色通常在室外溫或37℃反響20-30分鐘后即不再加深，再延伸反響時(shí)刻，可使本底值增高。OPD底物液受光照會(huì)自行變色，顯色反響應(yīng)避光進(jìn)行，顯色反響結(jié)束時(shí)參加停止液停止反響。OPD產(chǎn)品用硫酸停止后，顯色由橙黃色轉(zhuǎn)向棕黃色。 TMB受光照的影響不大，可在室溫中置于操作臺(tái)上，邊反響調(diào)查成果。但為確保實(shí)驗(yàn)成果的安穩(wěn)性，宜在規(guī)則的恰當(dāng)時(shí)刻閱讀成果。TMB經(jīng)HRP作用后，約40分鐘顯色達(dá)高峰，隨即逐步減弱，至2小時(shí)后即可*衰退至無(wú)色。TMB的停止液有多種，疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉（SDS）等酶抑制劑均可使反響停止。這類停止劑尚能使藍(lán)色保持較長(zhǎng)時(shí)刻（12-24小時(shí)）不褪，是目視判別的杰出停止劑。此外，各類酸性停止液則會(huì)使藍(lán)色轉(zhuǎn)變成黃色，此刻可用特定的波長(zhǎng)（450nm）測(cè)讀吸光值。
（2） 比色
比色前應(yīng)先用潔凈的吸水紙拭干板底附著的液體，然后將板準(zhǔn)確放入酶標(biāo)比色儀的比色架中。以軟板為載體的實(shí)驗(yàn)，需先將板置于規(guī)范96孔的座架中，才可進(jìn)行比色。在加底物液顯色前，先將軟板邊際剪凈，這么，此板就可*平妥坐入座架中。比色時(shí)應(yīng)先以蒸餾水校零點(diǎn)，測(cè)讀底物孔（未經(jīng)任何反響僅加底物液的孔）和空白孔（以生理鹽水或稀釋液替代標(biāo)本作全過(guò)程的孔），以記載本次實(shí)驗(yàn)的試劑情況。其后可用空白孔以蒸餾水校零點(diǎn)，以上各孔的吸光度需減去空白孔的吸光度，然后進(jìn)行核算。比色成果的表達(dá)以往通用光密度（oplical density，OD），現(xiàn)按規(guī)則用吸光度（absorbence，A），兩者意義相同。通常的表明辦法是，將吸收波長(zhǎng)寫于A字母的右下角，如OPD的吸收波長(zhǎng)為492nm，表明辦法為"A492nm"或"OD492nm"。
（3） 酶標(biāo)比色儀
酶標(biāo)比色儀簡(jiǎn)稱酶標(biāo)儀，通常指于測(cè)讀ELISA成果吸光度的光度計(jì)。對(duì)于固相載體方式的不一樣，各有特制的適用于板、珠和小試管的規(guī)劃。許多試劑公司配套供給酶標(biāo)儀。酶標(biāo)儀的主要功能指標(biāo)有：測(cè)讀速度、讀數(shù)的準(zhǔn)確性、重復(fù)性、準(zhǔn)確度和可測(cè)規(guī)模、線性等等。的酶標(biāo)儀的讀數(shù)通?？蓽?zhǔn)確到0.001，準(zhǔn)確性為±1%，重復(fù)性達(dá)0.5%。舉例說(shuō)，若某孔測(cè)得的A值為1.083，則該孔相對(duì)于空氣的實(shí)在A值應(yīng)為1.083±0.01（1.073~1.093），重復(fù)測(cè)定數(shù)次，其A值均應(yīng)1.083±0.05（1.078~1.088）在之間。酶標(biāo)儀的可測(cè)規(guī)模視各酶標(biāo)儀的功能而不一樣。一般的酶標(biāo)儀在0.000~2.000，新類型的酶標(biāo)儀上限拓寬達(dá)2.900，乃至更高。超出可測(cè)上限的A值常以"*"或"over"或其它符號(hào)表明。應(yīng)留意可測(cè)規(guī)模與線性規(guī)模的不一樣，線性規(guī)模常小于可測(cè)規(guī)模，比如某一酶標(biāo)儀的可測(cè)規(guī)模為0.000~2.900，而其線性規(guī)模僅0.000~2.000，這在定量ELISA中制造規(guī)范曲線時(shí)應(yīng)予留意。 酶標(biāo)儀不應(yīng)安頓在陽(yáng)光或強(qiáng)光照射下，操作時(shí)室溫宜在15~30℃，使用前先預(yù)熱儀器15-30分鐘，測(cè)讀成果更安穩(wěn)。測(cè)讀A值時(shí)，要選用產(chǎn)品的靈敏吸收峰，如OPD用492nm波長(zhǎng)。有的酶標(biāo)儀可用雙波長(zhǎng)式測(cè)讀，即每孔先后測(cè)讀兩次，在zui適波長(zhǎng)（W1），第二次在不靈敏波長(zhǎng)（W2），兩次測(cè)定間不移動(dòng)ELISA板的方位。例如OPD用492nm為W1，630nm為W2，終究測(cè)得的A值為兩者之差（W1-W2）。雙波長(zhǎng)式測(cè)讀可削減由容器上的劃痕或指印等形成的光攪擾。各種酶標(biāo)儀功能有所不一樣，使用中應(yīng)具體新聞?dòng)浾哒f(shuō)明書。
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