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在做ELISA試劑盒實驗的時候不需要做熱處理這一步

閱讀:322發布時間:2014-12-24

實驗ELISA試劑盒血清顯示,經過正確處理的熱滅活血清,對大多數的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,或*沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量,而造成細胞生長速率的降低。而經過熱處理的血清,沉淀物的形成會顯著的增多,這些沉淀物在倒立顯微鏡下觀察,像是 "小黑點",常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,ELISA試劑盒而把血清放在37C環境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。 
因此我們建議您,若非必須,如此一來,不但節省您寶貴的時間,更確保您血清的質量!另外,購買已滅活成品也不失一個捷徑,請在購買ELISA試劑盒的時候注意詢問廠家是否是已滅活ELISA試劑盒血清。 1、解凍血清時,請按照所建議的逐步解凍法(-2O。C至4。C至室溫),若血清解凍時改變的溫度太大(如-20。C至37。C),實驗顯示非常容易產生沉淀物。 
2、解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發生 
3、請勿將血清置于37。C太久。若在37。C放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩定的成分也會因此受到損害,而影響血清的質量。 
4、ELISA試劑盒血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。 
5、若必須做血清的熱滅活,請遵守56。C,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。血清解凍后發現有絮狀沉淀物出現,該如何處理? 欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內,以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養基內一起過濾。但不建議以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會阻塞過濾膜。 
何謂熱滅活?
一般是以56C,30分鐘來處理已解凍的血清,因為此加熱ELISA試劑盒步驟,可以使補體去活化,而補體所參與的反應有:溶細胞活性,平滑肌的收縮,肥大細胞和血小板組胺的釋放,增強吞噬作用,淋巴細胞、巨噬細胞的趨化和激活。 


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