糖異生系列果糖1,6二磷酸酯酶測試盒_微量法
測定方法:微量法
產品規格:100管/96樣
注 意 :正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
果糖-1,6二磷酸酶又稱果糖1,6二磷酸酯酶,催化1,6二磷酸果糖和水生成6磷酸果糖和無機磷,在糖的異生代謝和光合作用同化物蔗糖的合成中起關鍵性的作用。
測定原理:
FBP催化1,6二磷酸果糖和水生成6磷酸果糖和無機磷,在反應體系中添加的磷酸葡萄糖異構酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH,340nm下測定NADPH增加速率,即可計算FBP活性。
糖異生系列果糖1,6二磷酸酯酶測試盒_微量法
需自備的儀器和用品:
分光光度計/酶標儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液一:液體100mL×1瓶,4℃保存。
提取液二:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入20mL試劑四充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑二:液體7.2μL×1支,4℃保存;臨用前加入1mL蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑三:粉劑×1支,-20℃保存;臨用前加入1mL蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑四:液體25mL×1瓶, 4℃保存;
樣本的前處理:
①總FBP酶提?。航ㄗh稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液一,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時間1min),然后4℃,8000g離心10min,取上清測定。
②胞漿和葉綠體FBP酶的分離:按照植物組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液一),冰浴勻漿后于4℃,200g離心5min,棄沉淀,取上清在4℃,8000g離心10min,取上清用于測定胞漿FBP酶活性,取沉淀加1mL提取液二,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時間1min),然后4℃,8000g離心10min,取上清測定葉綠體中FBP酶活性。
建議測定總FBP酶活性,按照步驟①提取粗酶液,若需要分別測定胞漿和葉綠體中的FBP,則按照步驟②提取粗酶液。