(GSH)S-轉移酶GST測試盒 _氧化與抗氧化
測定方法:分光光度法
產品規格:50管/48樣
注 意:正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
(GSH)S-轉移酶GST測試盒 _氧化與抗氧化
測定意義:
GST 是一種具有多種生理功能的蛋白質家族,主要存在于細胞質內。GST 是體內解毒酶系統的重要組成部分,主要催化各種化學物質及其代謝產物與 GSH 的巰基共價結合,使親電化合物變為親水物質,易于從膽汁或尿液中排泄,達到將體內各種潛在或具備毒性的物質降解并排出體外的目的。因此,GST 在保護細胞免受親電子化合物的損傷中發揮著重要的生物學功能。此外,因為 GST 具有 GSH-Px 活性,亦稱為 non-Se GSH-Px,具有修復氧化破壞的大分子如 DNA、蛋白質等的功能。注意,GST 催化的反應減少 GSH 含量,但是不增加GSSG 含量。
測定原理:
GST 催化 GSH 與 CDNB 結合,其結合產物的光吸收峰波長為 340nm;通過測定 340nm 波長處吸光度上升速率,即可計算出 GST 活性。
自備儀器和用品:
紫外分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調節移液器、1mL 石英比色皿和蒸餾水。
試劑組成和配置:
試劑一:液體 50mL×1 瓶,4℃保存。
試劑二:液體 45mL×1 瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1 瓶,4℃保存。臨用前加 5 mL 蒸餾水溶解。
粗酶液提取:
1.組織:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 試劑一)進行冰浴勻漿。8000g,4℃離心 10min,取上清置冰上待測。
2.細菌、真菌:按照細胞數量(104 個):試劑一體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細胞加入 1mL 試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時間 3min);然后 8000g,4℃,離心 10min,取上清置于冰上待測。
3.血清等液體:直接測定。
測定操作:
1.分光光度計預熱 30 min,調節波長到 340 nm,用蒸餾水調零。
2.試劑三放在 25℃(一般物種)或者 37℃(哺乳動物)保溫。
3.測定管:取 1mL 石英比色皿,加入 100μL 上清液,900μL 試劑二和 100μL 試劑三,迅速混勻后于 340nm 測定吸光度變化,記錄 10 s 和 310 s 吸光度為 A1 和 A2。