氧化與抗氧化系列_過(guò)氧化氫(H2O2)測(cè)試盒
測(cè)定方法:微量法
產(chǎn)品規(guī)格:100管/96樣
注 意:正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
H2O2是生物體內(nèi)常見的活性氧分子,主要由SOD和XOD等催化產(chǎn)生,由CAT和POD等催化降解。H2O2不僅是重要的活性氧之一,也是活性氧相互轉(zhuǎn)化的樞紐。一方面,H2O2可以直接或間接地氧化細(xì)胞內(nèi)核酸,蛋白質(zhì)等生物大分子,并使細(xì)胞膜遭受損害,從而加速細(xì)胞的衰老和解體;另一方面H2O2也是許多氧化應(yīng)急反應(yīng)中的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子,。
氧化與抗氧化系列_過(guò)氧化氫(H2O2)測(cè)試盒
測(cè)定原理:
H2O2與硫酸鈦生成的過(guò)氧化鈦復(fù)合物,在415nm有特征吸收。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、丙酮100mL、濃鹽酸5mL、研缽和冰。
試劑的組成和配制:
試劑一:丙酮100mL×1瓶,4℃保存;(自備)
試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前加入3mL濃鹽酸充分溶解備用。用不完的試劑4℃保存;(溶解時(shí)間較長(zhǎng),約30min,可40℃-60℃加熱,務(wù)必提前準(zhǔn)備)
試劑三:液體10mL×1瓶,4℃保存;
試劑四:液體30mL×1瓶,4℃保存;
H2O2提取:
1、細(xì)菌或細(xì)胞樣品的制備:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);用試劑一定容至1mL;8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
2. 組織樣品的制備:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿;轉(zhuǎn)移至EP管中,用試劑一定容至1mL,8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
3、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。