氧化與抗氧化系列_單寧酶(TAN)測試盒
測定方法:微量法
產品規格:100管/48樣
注 意 :正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
單寧酶全稱是單寧酯酰水解酶(Tannase,EC 3.1.1.20),它可以水解沒食子酸單寧中的酯鍵和縮酚羧鍵,生成沒食子酸和葡萄糖。
氧化與抗氧化系列_單寧酶(TAN)測試盒
測定原理:
使用抗氧化劑沒食子酸丙酯(PG)作為單寧酶酶促反應的底物,在270nn下測定底物PG反應前后的光密度變化,計算單寧酶酶活力。
需自備的的儀器和用品:
紫外分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研缽、冰、蒸餾水
試劑的組成和配制:
試劑一:液體100mL×2瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1支,4℃保存;臨用前每支加入6mL試劑一,充分溶解后備用;用不完的試劑4℃保存;
粗酶液提取:
按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一),進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
液體樣本:直接取上清測定。
測定步驟:
1、分光光度計預熱30min以上,調節波長到270 nm,蒸餾水調零。
2、加樣表
試劑名稱(μL)對照管測定管
95℃水浴5min后滅活的粗酶液50
粗酶液50
試劑二5050
混勻,40℃準確保溫10 min后,置95℃水浴中10 min(蓋緊,防止水分散失),冷卻
試劑一900900
混勻,取200uL至微量石英比色皿或96孔UV板中,270nm處讀取各管吸光值。計算ΔA=A對照-A測定。每個測定管需設個一個對照管。