P450系列_NADPH-細(xì)胞-色素C還原酶NCR測(cè)試盒
測(cè)定方法：微量法
產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣
注 意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
細(xì)胞色素P450酶是一組主要存在于肝臟的同工酶，在外源物質(zhì)代謝中具有重要作用，尤其是藥物和毒物的代謝。NCR作為P450酶系的重要一員，催化氧化型P450還原再生。
P450系列_NADPH-細(xì)胞-色素C還原酶NCR測(cè)試盒
測(cè)定原理：
NCR催化NADPH還原氧化型細(xì)胞-色素C，還原型細(xì)胞-色素C在550nm處有特征吸收峰；通過(guò)測(cè)定550nm吸光度的增加速率，來(lái)計(jì)算NCR活性。
自備儀器和用品：
普通離心機(jī)，超速離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。
試劑組成和配置：
試劑一：粉劑×2瓶，4℃保存。臨用前根據(jù)用量每瓶加100mL蒸餾水充分溶解。
試劑二：液體×1瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×1管，-20℃保存。臨用前配制，加1.04 mL蒸餾水充分溶解，4℃保存。
試劑四：粉劑×1管，4℃保存。臨用前配制，加1100 μL蒸餾水充分溶解，4℃保存。
粗酶液提取：
1、除去細(xì)胞核和線粒體等：稱(chēng)約0.5g組織，加入4℃預(yù)冷的1 mL試劑一，冰上充分研磨，10 000g 4℃離心30min，取上清液，轉(zhuǎn)移到超速離心管中。
2、粗制微粒體：4℃，100 000g，離心60min，棄上清液。
3、除血紅蛋白等雜質(zhì)：向步驟2的沉淀中加1 mL試劑一，蓋緊后充分震蕩溶解，100 000g離心30min，棄上清液。
4、終微粒體：向步驟3的沉淀中加試劑二0.5 mL，蓋緊后充分震蕩溶解，4℃保存待測(cè)。
NADPH-細(xì)胞-色素C還原酶測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到550 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在37℃水浴中預(yù)熱30min。
3. 空白管：取微量石英比色皿/96孔板，依次加入10μL蒸餾水、180μL試劑二、10μL試劑三和10μL試劑四，迅速混勻后于550nm處測(cè)定2min內(nèi)吸光值變化，第10s和第130s吸光值。△A空白管=A2-A1。
4. 測(cè)定管：取微量石英比色皿/96孔板，依次加入10μL提取液、180μL試劑二、10μL試劑三和10μL試劑四，迅速混勻后于550nm處測(cè)定2min內(nèi)吸光值變化，第10s和第130s吸光值。△A測(cè)定管=A4-A3。
注意：空白管只需做一次。
環(huán)保在線