P450系列_苯胺4羥化酶(AH)測試盒
測定方法:微量法
產品規格:100管/48樣
注 意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
細胞色素P450酶是一組主要存在于肝臟的同工酶,在外源物質代謝中具有重要作用,尤其是藥物和毒物的代謝。AH在P450酶系中相當于CYP2E1亞型,CYP2E1不僅參與了藥物的代謝,而且還能催化多種前致癌物和前毒物的活化過程。
測定原理:
AH催化苯胺羥化后產生的4-氨基酚,進一步轉變為酚-吲哚復合物,在630nm處有特征吸收峰;通過測定630nm吸光度增加速率,來計算AH活性。
P450系列_苯胺4羥化酶(AH)測試盒
自備儀器及用品:
普通離心機、超速離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、雙蒸水和冰。
試劑組成和配制:
試劑一:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加入100mL蒸餾水,充分溶解。
試劑二:液體×1瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加入10mL蒸餾水,充分溶解。
試劑四:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加入5mL蒸餾水,充分溶解。
試劑五:液體×1瓶,4℃保存。
試劑六:粉劑×1瓶(腐蝕性試劑),4℃避光保存。臨用前加入10mL蒸餾水,充分溶解。
試劑七:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加入10mL蒸餾水充分溶解。
標準液:液體×1瓶,10μmol/L,4℃避光保存。
粗酶液提取:
1、除去細胞核,線粒體等大分子物質:稱約0.5g組織,加入1mL試劑一,冰上充分研磨,10 000g 4℃,離心30min,取上清液,轉移到超速離心管中。
2、粗制微粒體: 100 000g 4℃,離心60min,棄上清液。
3、除血紅蛋白等雜質:向步驟2的沉淀中加1mL試劑一,蓋緊后充分震蕩溶解,100 000g離心30min,棄上清液。
4、終微粒體:向步驟3的沉淀中加試劑二0.5mL,蓋緊后充分震蕩溶解,即粗酶液,待測。