蛋白-含量系列_BCA蛋白法含量測試盒
測定方法：微量法
產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣
注 意：正式測定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計(jì)算。此外，可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析。
測定原理：
堿性條件下，蛋白質(zhì)中半胱-氨酸、胱-氨酸、色-氨酸、酪-氨酸以及肽鍵，能將Cu2+還原成Cu+；2分子的BCA與Cu+結(jié)合，生成紫色絡(luò)合物，在540-595nm有吸收峰，562nm處吸收峰-強(qiáng)。
蛋白-含量系列_BCA蛋白法含量測試盒
自備儀器和用品：
臺式離心機(jī)、恒溫水浴鍋、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、移液器和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑A：液體25mL×1瓶，4℃保存。
試劑B：液體0.5mL×1支，4℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)品：液體2mL×1支，4℃保存。
工作液配制：臨用前請根據(jù)擬用工作液體積（樣本數(shù)×0.2mL），將試劑A和B按照50：1的比例混合，蓋緊后充分混勻。
樣品中可溶性蛋白質(zhì)提取：
1.液體樣品：澄清液體樣品可以直接測定。
2.組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液（自備，根據(jù)需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水）
冰浴勻漿，10000rpm，4℃離心10min，取上清，即待測液。
3. 細(xì)菌、細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后10000rpm，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要做一次。
計(jì)算公式：
Cpr (mg/mL)= C標(biāo)準(zhǔn)品×（A測定管－A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）
=0.5×（A測定管－A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）
Cpr (mg/g 鮮重)= C標(biāo)準(zhǔn)品×（A測定管－A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）÷ W
=0.5×（A測定管－A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）÷ W
W: 樣本質(zhì)量，g
注意事項(xiàng)：
BCA法蛋白含量測定試劑盒，適用于測定蛋白濃度在20-5000μg/ml樣品。測定前取1-2個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn)，若A測定管－A空白管﹥1.5，需將樣本用提取液稀釋后再測定，以確保測定的準(zhǔn)確性。
環(huán)保在線