亞硝酸還原酶(NiR)測試盒_氮代謝系列
測定方法:分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:50管/24樣
注 意: 正式測定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義:
硝酸還原酶(NiR)是一類能催化亞硝酸鹽還原的酶,廣泛存在于微生物及植物體內(nèi),是自然界氮循環(huán)過程中的關(guān)鍵酶,可以將亞硝酸鹽降解為NO或NH3,從而減少環(huán)境中亞硝態(tài)氮的積累,降低因亞硝酸鹽累積而造成的對(duì)生物體的毒害作用。
亞硝酸還原酶(NiR)測試盒_氮代謝系列
測定原理:
亞硝酸還原酶可將NO2—還原為NO,使樣品中參與重氮化反應(yīng)生成紫紅色化合物的NO2—減少,即540nm處吸光值的變化可反應(yīng)亞硝酸還原酶的活性。
需自備的儀器和用品:
天平、研缽、可見分光光度計(jì)、水浴鍋、低溫離心機(jī)、1mL玻璃比色皿。
試劑的組成和配制:
提取液:液體80mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體10mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加12mL蒸餾水溶解。
試劑三:液體12mL×1瓶,4℃保存。(如出現(xiàn)沉淀可以70-80℃加熱溶解)
試劑四:液體25mL×1瓶,4℃避光保存。(如出現(xiàn)沉淀可以70-80℃加熱溶解)
試劑五:液體25mL×1瓶,4℃避光保存。
工作液:臨用前根據(jù)用量將試劑四和試劑五以1:1的比例混合。
酶液提取:
1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2.細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后10000g,4℃離心10min,取上清置于冰上待測。