氧化磷酸化系列_線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ
測定方法：微量法
產品規格：100管/96樣
注 意 ：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
復合體Ⅰ（EC 1.6.5. 3）又稱NADH-CoQ 還原酶或NADH脫氫酶，廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞的線粒體中，是線粒體內膜中大的蛋白復合物。該酶催化一對電子從NADH傳遞給CoQ，同時可使O2還原生成O2.-，是呼吸電子傳遞鏈上產生O2.-的主要部位。測定該酶活性，不僅可以反映呼吸電子傳遞鏈（ETC）狀態，而且可以反映活性氧（ROS）生成狀態。
氧化磷酸化系列_線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ
測定原理：
復合體Ⅰ能夠催化NADH脫氫生成NAD+，在340nm下測定NADH的氧化速率計算出該酶活性的大小。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
試劑一：液體100mL×1瓶，-20℃保存；
試劑二：液體20mL×1瓶，-20℃保存；
試劑三：液體1.5mL×1瓶，-20℃保存；
試劑四：液體25mL×1瓶，-20℃保存；
試劑五：液體1mL×1支，-20℃保存；
試劑六：粉劑×1支，-20℃保存，用時加入2mL蒸餾水；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
工作液的配制：臨用前將試劑五轉移到試劑四中混合溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
樣本的前處理：
組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：
①準確稱取0.1g組織或收集500萬細胞，加入1mL試劑一和10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
②將勻漿600g，4℃離心5min。
③棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心10min。
④上清液即為除去線粒體的胞漿蛋白，可用于測定從線粒體泄漏的復合體Ⅰ（此步可選做）。
⑤步驟④中的沉淀即為線粒體，加入200uL試劑二和2uL 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10秒，重復30次），用于復合體Ⅰ酶活性測定。
測定步驟：
1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長至340nm，蒸餾水調零。
2、樣本測定
（1）工作液于37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）孵育5min。
（2）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本、200μL工作液和15μL試劑六，混勻，記錄340nm處初始吸光值A1和 2min后的吸光值A2，計算ΔA=A1-A2。
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