氧化磷酸化系列_轉氫酶-2測試盒
測定方法：微量法
產品規格：100管/96樣
注 意 ：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
氧化磷酸化系列_轉氫酶-2測試盒
測定意義：
TH位于線粒體的內膜上，又稱為線粒體復合體六，催化NADH+NADP+和NAD++NADPH相互轉化，調節線粒體NAD(H)和NADP(H)平衡。把逆向反應稱為TH-2，催化NADPH和NAD+生成NADP+和NADH。
測定原理：
NADH和NADPH均在340nm有特征吸收，因此TH催化的轉氫反應不能導致340nm吸光度發生變化。用人工合成底物3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸（APAD+）替代NAD+，TH-2催化APAD+還原生成APADH，APADH在375nm有特征光吸收，測定375nm光吸收的增加速率，來計算TH-2活性。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
試劑一：液體100mL×1瓶，-20℃保存；
試劑二：液體50mL×1瓶，-20℃保存；
試劑三：液體18mL×1瓶，4℃保存；
試劑四：粉劑×1支，-20℃保存；
試劑五：粉劑×1支，-20℃保存；
樣本的前處理：
組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：
①準確稱取0.1g組織或收集500萬細胞，加入1mL試劑一，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
②將勻漿600g，4℃離心5min。
③棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心10min。
④上清液即為除去線粒體的胞漿蛋白，可用于測定從線粒體泄漏的TH-2（此步可選做）。
⑤步驟④中的沉淀即為線粒體，加入500uL試劑二，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10秒，重復30次），用于TH-2活性測定。
測定步驟：
1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長至375nm，蒸餾水調零。
2、樣本測定
（1）工作液的配制：臨用前將試劑四、五轉移到試劑三中混合溶解，置于37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴5min；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
（2）在微量石英比色皿或96孔板中加入20μL樣本和180μL工作液，混勻，立即記錄375nm處初始吸光值A1和 10min后的吸光值A2，計算ΔA=A2-A1。
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