線粒體呼吸鏈復合體Ⅳ_氧化磷酸化系列
測定方法：分光光度法
產品規格：25管/24樣
注 意 ：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
線粒體復合體Ⅳ又稱細胞-色素C氧化酶，也是線粒體呼吸電子傳遞鏈主路和支路的共有成分，負責催化還原型細胞-色素C的氧化，并終把電子傳遞給氧，生成水。
線粒體呼吸鏈復合體Ⅳ_氧化磷酸化系列
測定原理：
還原型細胞-色素C在550nm有特征光吸收，線粒體復合體Ⅳ催化還原型細胞-色素C生成氧化型細胞-色素C，因此550nm光吸收下降速率能夠反映線粒體復合體Ⅳ酶活性。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
試劑一：25mL×1瓶，-20℃保存；
試劑二： 5mL×1瓶，-20℃保存；
試劑三：0.5 mL×1瓶，-20℃保存；
試劑四：液體10mL×2瓶，4℃保存；
試劑五：粉劑×2支，-20℃保存；
試劑六：粉劑×2支，-20℃保存；
樣本的前處理：
組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：
1、準確稱取0.1g組織或收集500萬細菌或細胞，加入1mL試劑一和10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
2、將勻漿600g，4℃離心5min。
3、棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心10min。
4、上清液即為除去線粒體的胞漿蛋白，可用于測定從線粒體泄漏的復合體Ⅳ（此步可選做）。
5、步驟④中的沉淀即為線粒體，加入200uL試劑二和2uL 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10秒，重復30次），用于復合體Ⅳ酶活性測定。
測定步驟：
1、分光光度計預熱30min以上，調節波長至550nm，蒸餾水調零。
2、樣本測定
（1）工作液的配制：臨用前取試劑四、試劑五、試劑六各一支，將試劑五和試劑六依次轉移到試劑四中混合溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
（2）將工作液置于37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）孵育5min；
（3）在1mL玻璃比色皿中加入80μL樣本和800μL工作液，混勻，記錄550nm處初始吸光值A1和 37℃反應30min后的吸光值A2，計算ΔA=A1-A2。
注意點：
1、若ΔA大于0.2，需將樣本用試劑二稀釋適當倍數（計算公式中乘以相應稀釋倍數），使A1-A2小于0.2，可提高檢測靈敏度。
2、動物肝臟樣本由于酶活性過高， 1分鐘內吸光值就會到達平臺期，務必先進行2個樣本的預測定。可將樣本用試劑二稀釋10~50倍，反應時間縮到到30秒或1分鐘（計算公式中代入實際反應時間，并乘以相應稀釋倍數）。其他樣本可按照正常測定步驟進行。
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