土壤_土壤外切β14葡聚糖酶纖維二糖水解酶
測定方法:微量法
產品規格:100管/48樣
注 意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
C1(EC3.2.1.91)存在于細菌、真菌和動物體內,是纖維素酶系的組份之一,C1催化多聚糖鏈的末端非還原端釋放出纖維二糖和葡萄糖。
土壤_土壤外切β14葡聚糖酶纖維二糖水解酶
測定原理:
采用3,5-二硝基水楊酸法測定S-C1催化微晶纖維素降解產生的還原糖的含量。
需自備的儀器和用品:
酶標儀/可見分光光度計、水浴鍋、離心機、可調式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體6mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:液體25mL×1瓶,4℃保存;
樣品測定的準備:
稱取約0.1g新鮮土樣或風干土樣,加入1mL提取液,進行冰浴勻漿,室溫振蕩提取30min,然后10000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
測定步驟:
1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至540nm,蒸餾水調零。
2、加樣表(在EP管中依次加入下列試劑):
試劑名稱(μL)測定管對照管
樣本1010
試劑一 100
蒸餾水 100
混勻,37℃準確水浴2h
試劑二 200200
混勻, 90℃水浴10min(蓋緊,防止水分散失),冷卻后,取200μL至微量石英比色皿或96孔板中,測540nm下吸光值A,計算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管需設一個對照管。