NADP蘋果酸酶(NADP-ME)測試盒(輔酶Ⅱ系列)
測定方法:分光光度法
產品規格:50管/48樣
注 意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
ME廣泛存在于微生物、培養細胞、動物和植物胞漿中,尤其在植物組織中活性較高。ME催化蘋果酸氧化脫羧的可逆反應,產生丙酮酸和CO2,以及伴隨NAD(P)+的還原反應,是蘋果酸代謝的關鍵酶。ME活性與生物合成和抗氧化密切相關。近年來植物ME活性測定較多,已經成為抗氧化研究的熱點。根據輔酶專一性和對底物特異性的不同,可將ME分為NAD-ME(EC1.1.1.38)和NADP-ME(EC1.1.1.40)。
NADP蘋果酸酶(NADP-ME)測試盒(輔酶Ⅱ系列)
測定原理:
NADP-ME催化NADP+還原成NADPH,在340nm下測定NADPH增加速率。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 mL石英比色皿和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:60mL×1瓶,4℃保存。;
試劑一:液體60mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1瓶,-20℃保存; 臨用前加入50mL試劑一充分振蕩,溶解待用,用不完的試劑分裝后-20度保存,禁止反復凍融。
試劑三:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入6mL蒸餾水充分振蕩,溶解待用,用不完的試劑分裝后-20度保存,禁止反復凍融。
樣本的前處理:
1、細菌、細胞或組織樣品的制備:
細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);14000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。14000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、血清(漿)樣品:直接檢測。