人糖皮質(zhì)激素受體β(GR-β)ELISA Kit說明書

ELISA小常識：
間接法是檢測抗體zui常用的方法，其原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體以檢測已與固相結(jié)合的受檢抗體，故稱為間接法。操作步驟如下：(1)將特異性抗原與固相載體連接，形成固相抗原(2)加稀釋的受檢血清：其中的特異抗體與抗原結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。(3)加酶標(biāo)抗抗體：與固相復(fù)合物中的抗體結(jié)合，從而使該抗體間接地標(biāo)記上酶。(4)加底物顯色：顏色深度代表標(biāo)本中受檢抗體的量。

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酶標(biāo)試劑盒操作中出現(xiàn)的問題：現(xiàn)象、可能原因和解決辦法：
1、 不同廠家生產(chǎn)的試劑盒因生產(chǎn)工藝和操作方法略有不同，務(wù)必按照所用試劑盒嚴(yán)格操作，否則容易產(chǎn)生檢測結(jié)果的不確定性.
2、 若不同批號試劑的不同組分（A液或酶工作液），或不同試劑的不同組分進(jìn)行交叉使用，有可能出現(xiàn)顯色淺或本底高，花板等情形。
3、 加樣時樣品量誤差，對于陰或很陽的標(biāo)本影響不大，但對閾值附近的標(biāo)本影響*，建議校對加樣器。
4、 反應(yīng)時間的誤差，做大量標(biāo)本時，*孔和zui后一孔以及一些特殊標(biāo)本可能影響較大。
5、 由于滴瓶的精密性肯定不如加樣器，不排除不同滴頭滴量的誤差。另外滴加過程中是否產(chǎn)生氣泡、速度是否均勻，是否顫動等影響液量的因素均可導(dǎo)致以上情況。高標(biāo)準(zhǔn)要求時應(yīng)使用加樣器。
6、 閾值附近實際上是個灰區(qū)（gray scale）,不能截然分為陰性、陽性，國外廠家均要求對這部分可疑標(biāo)本進(jìn)行奇數(shù)次復(fù)檢，以次數(shù)多者為準(zhǔn)，如一次陽兩次陰zui后判為陰，但實際上是否為陰不好說，只有判為可疑，臨床上可以讓患者過一段時間后再測。
7、 肉眼觀察稍顯色，酶標(biāo)儀打印為陰性的標(biāo)本在實際工作中是難以避免的，肉眼目測結(jié)果不可靠，應(yīng)以酶標(biāo)儀判讀為準(zhǔn)。
8、 由陰性變?yōu)閺?qiáng)陽性原因多為操作過程中漏加試劑等有關(guān)。
9、 臨界值附近標(biāo)本波動為正常現(xiàn)象，任何試劑均不可避免。可以考慮將標(biāo)本做奇數(shù)次復(fù)檢。

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