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鹿紅細胞膜蛋白(EMP)ELISA試劑盒

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更新時間:2018-05-18 21:21:29瀏覽次數(shù):240次

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實驗材料與試劑配制:

1.儀器與材料:酶標儀(使用前預(yù)熱30分鐘),微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水,濾紙。

2. 洗液的配制:按1:30的比例配制洗液備用。

三.樣品收集、處理及保存

1.細胞培養(yǎng)上清:適用于檢測體外培養(yǎng)的細胞分泌性成份。用無菌管收集細胞上清液,以1000×g離心15分鐘,收集上清。

2)細胞:用PBS反復(fù)洗滌細胞3次,調(diào)整細胞濃度達到104-106/ml 左右,通過反復(fù)凍融,使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份,或者細胞超聲粉碎,離心取上清液檢測。

3)血清:在室溫下,血液自然凝固,以1000×g離心15分鐘,取上清待測。

4)血漿:應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合后靜置10-20 分鐘后,以1000×g離心15分鐘,收集上清。

5)體液:包括胸腹水、腦脊液,分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集,以1000×g離心15分鐘,收集上清。

6.)組織標本:切取組織標本,稱取重量0.5mg,加入500ul PBS,用手工或勻漿器,或超聲破碎儀將標本勻漿,以2000-3000 rmp離心20 分鐘,收集上清進行檢測。

樣品中不能含有NaN3,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

7)保存:如果樣品不能立即檢測,應(yīng)將其分裝,-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。血液標本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

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評價方法
◎1)發(fā)質(zhì)控物進行調(diào)查,這是目前國內(nèi)外常見的形式,采用定期發(fā)放質(zhì)控物至各實驗室,各實驗室在規(guī)定的日期進行檢驗,并將結(jié)果報至組織者(部、省臨檢中心)。組織者通過統(tǒng)計分析,再將評價結(jié)果寄回實驗室,使其了解工作質(zhì)量,發(fā)現(xiàn)問題,提高質(zhì)量。其缺點為由于各實驗室吃小灶或互相打修改結(jié)果而達不到真正評價作用。
◎2)現(xiàn)場調(diào)查,事先不通知,臨時派出人員到各實驗室,規(guī)定采用常規(guī)方法,檢測一組標本,進行評價。這種方法可以解決實際問題,進行現(xiàn)場指導(dǎo),組織者常因人力、物力的原因而不能經(jīng)常性進行。

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