大鼠載脂蛋白E(Apo-E)ELISA試劑盒
大鼠載脂蛋白E(Apo-E)ELISA試劑盒操作步驟
1. 包被抗原：用包被液將抗原作適當稀釋, 一般為1～10微克/孔，每孔加200微升，37℃溫育1小時后，4℃冰箱放置16～18小時。
2. 洗滌：倒盡板孔中液體，加滿洗滌液，靜放三分鐘，反復三次，zui后將反應板倒置在吸水紙上，使孔中洗滌液流盡。
3. 加封閉液200微升，37℃放置一小時。
4. 洗滌同2。
5. 加被檢血清：用稀釋液將被檢血清作幾種稀釋,，每孔200微升。同時作稀釋液對照。37℃放置2小時。
6. 洗滌同2。
7. 加辣根過氧化物酶羊抗兔IgG, 每孔200微升, 放置37℃ 1小時。
8. 洗滌同2。
9. 加底物：鄰苯二胺溶液加200ml，室溫暗處10--15分鐘。
10. 加終止液：每孔50微升。
11. 觀察結果：用酶聯免疫檢測儀記錄490nm讀數。
大鼠載脂蛋白E(Apo-E)ELISA試劑盒
HRP的底物
HRP催化過氧化物的氧化反應，代表性的過氧化物為H2O2，其反應式如下：
DH2+ H2O2 D+ H2O
上式中，DH2為供氧體，H2O2為受氫體。在ELISA中，DH2一般為無色化合物，經酶作用后成為有色的產物，以便作比色測定。常用的供氫體有鄰苯二胺(O-phenylenediamine, OPD)、四甲基聯苯胺(3,3',5,5'-tetramethylbenzidine, TMB)和ABTS[2,2'-azino-di-(3- ethylbenziazobine sulfonate-6)]。
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