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人β位淀粉樣前體蛋白裂解酶1(BACE1)ELISA試劑盒

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更新時間:2018-05-23 04:32:06瀏覽次數(shù):183次

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人β位淀粉樣前體蛋白裂解酶1(BACE1)ELISA試劑盒
酶聯(lián)免疫吸附試驗 定義:一種酶聯(lián)免疫技術(shù)。用于檢測包被于固相板孔中的待測抗原(或抗體)。即用酶標記抗體,并將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面,使抗原抗體反應(yīng)在固相載體表面進行,用洗滌法將液相中的游離成分洗除,Z后通過酶作用于底物后顯色來判斷結(jié)果。

人β位淀粉樣前體蛋白裂解酶1(BACE1)ELISA試劑盒

操作步驟:

實驗開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應(yīng)預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高時,應(yīng)對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。

2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內(nèi)配制),酶標板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

4. 每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性,底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后立即進行檢測。

人β位淀粉樣前體蛋白裂解酶1(BACE1)ELISA試劑盒

常規(guī)條件下,未知值質(zhì)控血清變異(routine conditions variancl-unknown value 簡稱RCVU)的測定

有時為了避免主觀性,再作RCVU測定。

測定步驟同RCVK,但檢測的操作者不知質(zhì)控血清的定值,或在操作者不知哪份是質(zhì)控血汪清的條件下進行常規(guī)檢驗,以排除操作者的主觀性。在此不再舉例說明。

人β位淀粉樣前體蛋白裂解酶1(BACE1)ELISA試劑盒

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