人癌蛋白誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄物3(OIT3)ELISA試劑盒

試劑盒組成及試劑配制

1. 酶聯(lián)板：一塊（96孔）

2. 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為1,000 pg/ml，做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋）后，分別稀釋1,000 pg/ml，500 pg/ml，250 pg/ml，125 pg/ml，62.5 pg/ml，31.2 pg/ml，15.6 pg/ml，樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 pg/ml，臨用前15分鐘內(nèi)配制。如配制500 pg/ml標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml（不要少于0.3ml）1,000 pg/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。

3. 樣品稀釋液：1×20ml。

4. 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。

5. 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。

6. 檢測(cè)溶液A：1×120μl（1:100）臨用前以檢測(cè)稀釋液A 1:100稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制（100μl/孔），實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl檢測(cè)溶液A加990μl檢測(cè)稀釋液A的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制。

7. 檢測(cè)溶液B：1×120μl/瓶（1:100）臨用前以檢測(cè)稀釋液B 1:100稀釋。稀釋方法同檢測(cè)溶液A。

8. 底物溶液：1×10ml/瓶。

9. 濃洗滌液：1×30ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。

10. 終止液：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

11. 覆膜：5張

12. 使用說(shuō)明書：1份

人癌蛋白誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄物3(OIT3)ELISA試劑盒

標(biāo)記的免疫測(cè)定

如上所述，免疫測(cè)定是一種很敏感的測(cè)定方法，抗原抗體反應(yīng)后直接測(cè)定形成的沉淀或濁度，敏感度可達(dá)5~10μg/ml，但在臨床檢驗(yàn)中，某些待測(cè)物在標(biāo)本中的含量遠(yuǎn)低于這一水平，因此要尋找增加敏感度的方法。標(biāo)記的免疫測(cè)定是將檢測(cè)試劑中的抗原或抗體用可微量測(cè)定的物質(zhì)加以標(biāo)記，通過測(cè)定標(biāo)記物來(lái)提高敏感度。在放射免疫測(cè)定和酶免疫測(cè)定中，標(biāo)記物分別為放射性核素和酶，zui后用測(cè)定放射性和酶活力來(lái)計(jì)算待檢物的量，敏感度可比直接測(cè)定沉淀物提高數(shù)百至數(shù)千倍。在標(biāo)記免疫測(cè)定中，一般加入過量的標(biāo)記試劑以保證與待測(cè)物*反應(yīng)。以標(biāo)記抗體（Ab^※）檢測(cè)抗原（Ag）為例，反應(yīng)式如下：

Ag+ Ab^※ → AgAb^※+ Ab^※

在反應(yīng)產(chǎn)物中有與Ag結(jié)合的Ab^※和游離和Ab^※，如不將兩者分離而測(cè)定標(biāo)記物，測(cè)得的結(jié)果將為兩者之和。因此，游離標(biāo)記物與結(jié)合標(biāo)記物的分離是標(biāo)記免疫測(cè)定中的重要步驟?？刹捎枚喾N手段，固相載體是其中之一。如將抗原或抗體包被在固相載體上，然后再與標(biāo)記的抗原或抗體直接反應(yīng)，結(jié)合的標(biāo)記物被固定在載體上，而游離的標(biāo)記物留于溶液中。這樣可以通過洗滌將游離的Ab^※除去，結(jié)合標(biāo)記物的測(cè)定可在固相上進(jìn)行。

人癌蛋白誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄物3(OIT3)ELISA試劑盒