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江萊生物-中國老牌試劑供應商

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細胞樣本的前處理

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一、勻漿介質

一般采用0.05 mol/L Tris-HCl, pH 7.4 磷酸鹽緩沖液(PBS),客戶可根據(jù)樣本及測定指標的情況自行設定濃度,目的是保持樣本的等滲環(huán)境。

二、細胞樣本的前處理:

1、細胞沉淀的收集:

① 懸浮細胞: 對于懸浮培養(yǎng)的細胞,直接通過離心收集細胞沉淀,將培養(yǎng)液在室溫條件下1000轉/分,離心10分鐘,棄上清留細胞沉淀。

② 貼壁細胞: 對于貼壁培養(yǎng)的細胞,用*將細胞消化下來,或用細胞刮將細胞刮下來,將培養(yǎng)液在室溫條件下1000轉/分,離心10分鐘,棄上清留細胞沉淀。

我們一般建議客戶,細胞密度不要小于一百萬個/ml。

2、細胞沉淀的洗滌:

在細胞沉淀中加入0.5-1ml的PBS (等滲), 輕輕顛倒混勻,將培養(yǎng)液在室溫條件下1000轉/分,離心10分鐘,棄上清留細胞沉淀。

重復上述操作反復洗滌1~2次。

3、勻漿的方式:手工勻漿,超聲破碎,裂解液裂解,反復凍融。

① 手工勻漿:在細胞沉淀中加入一定量的PBS(PBS的加入量根據(jù)所測指標的不同而有所改變,一般加入0.5ml,細胞密度不小于一百萬個/ml),混勻,將細胞懸浮于PBS中,用移液器將細胞懸浮液移至玻璃勻漿管中(2ml玻璃勻漿管),將玻璃勻漿管置于冰水混合物中,手動勻漿3分鐘,然后取破碎好的細胞懸浮液進行測定。

② 超聲破碎:

在細胞沉淀中加入一定量的PBS(PBS的加入量根據(jù)所測指標的不同而有所改變,一般加入0.5ml,細胞密度不小于一百萬個/ml),混勻,將細胞懸浮于PBS中,在冰水浴條件下進行如下操作:

     a、用超聲粉碎機進行粉碎,可用Soniprep150型超聲波發(fā)生器以振幅14微米超聲處理30秒使細胞破碎,也可用國產(chǎn)超聲波發(fā)生儀,用400安培,5秒/次,間隙10秒反復3~5次。

      b、用超聲細胞破碎儀,300W功率,每次超聲3~5秒,間隔30秒,重復4~5次。

③ 裂解液裂解 

常用裂解液有SDSNP-40TritonX-100,這三種去垢劑的作用是不同的,或者說作用力量強弱不同。

1、SDS屬于離子型去垢劑,zui厲害,基本可以把細胞*破掉,DNA會釋放出來,裂解液變得很粘稠。

2、NP-40是很溫和的去垢劑,1%濃度的基本可以破壞掉胞膜,而對核膜破壞的作用弱,結合特定的buffer可以獲得胞漿蛋白。

3、TritonX-100的能力介于NP40和SDS之間,偏向于NP40,也是常用的細胞裂解液成分之一,在保護蛋白活性方面有一定作用(SDS基本會使蛋白變性失活)。

去垢劑屬性只是一方面,buffer、配比、濃度、提取方法和材料處理也都是關鍵因素

由于很多裂解液都是蛋白變性劑,對酶活力的測定有一定的影響,一般不*用裂解液進行裂解。

④ 反復凍融:

在細胞沉淀中加入一定量的PBS(PBS的加入量根據(jù)所測指標的不同而有所改變,一般加入0.5ml,細胞密度不小于一百萬個/ml),混勻,將細胞懸浮于PBS中,放低溫冰箱中結冰,溶解,再結冰,再溶解,反復3次左右)。

                由于反復凍融對酶活力影響較大,一般不*使用


產(chǎn)品:

刺人參苷S標準品,cas:226572-11-8對照品
豬膽粉對照品/標準品
[4-(3-甲基苯氨基)-3-吡啶磺酰胺](拖拉塞米雜質A)標準品/對照品
*對照品/標準品
*系統(tǒng)適用性對照品標準品/對照品
異鼠李素標準品/對照品
鹽酸三羥芐基芐絲肼對照品/標準品
硫乙醇酸鹽流體對照培養(yǎng)基
精噁唑禾草靈標準品|對照品
*標準品,cas:114-49-8對照品
羥基*A對照品/標準品
九里香酮標準品,cas:19668-69-0對照品
木犀草苷標準品/對照品
異型南五味子丁素對照品/標準品
*對照品/標準品
酰嘧磺隆標準品|對照品,cas:120923-37-7
石斛酚對照品/標準品
*標準品/對照品
芹菜素-7-O-葡萄糖苷標準品,cas:578-74-5對照品
老龍皮酸(網(wǎng)脊衣酸)對照品/標準品
白頭翁皂苷D標準品,cas:68027-15-6對照品
*對照品/標準品
CAS:40957-83-3,黃豆黃素標準品/對照品
西洋參標準品/對照品
*標準品/對照品
人參皂苷Rgl對照品/標準品
酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂(YPD)對照培養(yǎng)基
CAS:2115-91-5,石斛堿標準品/對照品
*對照品/標準品
S-氰戊菊酯標準品|對照品
虎杖葉對照品/標準品
人參皂苷 R-Rg3標準品,cas:38243-03-7對照品
麥芽對照品/標準品
阿洛西林標準品/對照品
CAS:51330-27-9,大豆皂苷Bb標準品/對照品
異肥皂草苷標準品,cas:19416-87-6對照品
CAS:74805-92-8,甲基麥冬二氫高異黃酮A標準品/對照品
秦皮素對照品/標準品
川牛膝對照品/標準品
CAS:149-64-4,丁溴酸東莨菪堿標準品/對照品
EPA芳香有機揮發(fā)物Method503.1-Mix2標準品|對照品
鈹標準溶液,cas:7440-41-7
CAS:23696-28-8,喹乙醇標準品/對照品價格
黑豆對照品/標準品
原海蔥甙A標準品,cas:466-06-8對照品
雙硫化合物對照品/標準品
人參皂苷Rg5標準品,cas:186763-78-0對照品
偽金絲桃素標準品,cas:55954-61-5對照品
白花前胡乙素對照品/標準品
CAS:88901-41-1,羅漢果苷  IVa標準品/對照品
梔子黃素 B標準品,cas:2798-20-1對照品
水胺硫磷標準品/對照品價格
3,4,5-*基苯甲酸標準品/對照品
大戟二烯醇對照品/標準品
*對照品/標準品
CAS:10380-28-6,8-羥基喹啉銅標準品/對照品價格
桃葉珊瑚苷對照品/標準品
Australine Hydrobromide標準品,cas:118396-02-4對照品
咪鮮胺標準品|對照品,cas:67747-09-5
*對照品/標準品
CAS:632-85-9,漢黃芩素標準品/對照品
丹皮酚對照品/標準品
2,2,3,3,4,4,5,56,6-十溴代-1,1-聯(lián)苯標準品|對照品,cas:13654-09-6
丙體六六六-異辛烷溶液標準品|對照品
側柏葉標準品/對照品
*對照品/標準品
金銀花對照品/標準品
*標準品/對照品
3,6'-二芥子酰基蔗糖標準品/對照品
槐米標準品/對照品
洗碗葉對照品/標準品
馬布特羅標準品|對照品,cas:54240-36-7
羥基積雪草苷對照品/標準品
氟氯西林對照品/標準品
*對照品/標準品
乙酰哈巴苷標準品/對照品
CAS:26530-20-1,2-辛基-4-異噻唑啉-3-酮(OIT)標準品/對照品價格

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