試劑盒名稱：人大皰性類天皰瘡抗體elisa試劑盒

規(guī)      格：48T/96T

產(chǎn)品的用途：僅供科研ELISA檢測(cè)試劑盒

檢測(cè)的原理：采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。

標(biāo)本的處理：

（1）細(xì)胞培養(yǎng)上清液

根據(jù)需要用試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)稀釋液稀釋樣品，然后按照說明書所述方法檢測(cè)。*稀釋濃度是稀釋5倍。

（2）腦脊液

根據(jù)需要用試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)稀釋液稀釋樣品，然后按照說明書所述方法檢測(cè)。*稀釋濃度是5倍。

（3）血漿

①用EDTA2K離心收集在真空血液收集管中的血液，5,000×g，15分鐘，4℃，分離血漿樣品，然后儲(chǔ)存在零下80℃直到使用。

②用試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)稀釋液5倍稀釋血漿以避免血漿中的干擾物質(zhì)影響檢測(cè)，按照說明書方法檢測(cè)。

人大皰性類天皰瘡抗體elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)過程中酶標(biāo)比色儀的使用

    酶標(biāo)比色儀簡(jiǎn)稱酶標(biāo)儀，通常指于測(cè)讀ELISA結(jié)果吸光度的光度計(jì)。針對(duì)固相載體形式的不同，各有特制的適用于板、珠和小試管的設(shè)計(jì)。許多試劑公司配套供應(yīng)酶標(biāo)儀。酶標(biāo)儀的主要性能指標(biāo)有：測(cè)讀速度、讀數(shù)的準(zhǔn)確性、重復(fù)性、精確度和可測(cè)范圍、線性等等。優(yōu)良的酶標(biāo)儀的讀數(shù)一般可精確到0.001，準(zhǔn)確性為±1%，重復(fù)性達(dá)0.5%。舉例說，若某孔測(cè)得的A值為1.083，則該孔相對(duì)于空氣的真實(shí)A值應(yīng)為1.083±0.01(1.073～1.093)，重復(fù)測(cè)定數(shù)次，其A值均應(yīng)1.083±0.05(1.078～1.088)在之間。酶標(biāo)儀的可測(cè)范圍視各酶標(biāo)儀的性能而不同。普通的酶標(biāo)儀在0.000～2.000，新型號(hào)的酶標(biāo)儀上限拓寬達(dá)2.900，甚至更高。超出可測(cè)上限的A值常以"*"或"over"或其它符號(hào)表示。應(yīng)注意可測(cè)范圍與線性范圍的不同，線性范圍常小于可測(cè)范圍，比如某一酶標(biāo)儀的可測(cè)范圍為0.000～2.900，而其線性范圍僅0.000～2.000，這在定量ELISA中制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)應(yīng)予注意。

    酶標(biāo)儀不應(yīng)安置在陽光或強(qiáng)光照射下，操作時(shí)室溫宜在15～30℃，使用前先預(yù)熱儀器15-30分鐘，測(cè)讀結(jié)果更穩(wěn)定。

測(cè)讀A值時(shí)，要選用產(chǎn)物的敏感吸收峰，如OPD用492nm波長(zhǎng)。有的酶標(biāo)儀可用雙波長(zhǎng)式測(cè)讀，即每孔先后測(cè)讀兩次，*次在zui適波長(zhǎng)(W1)，第二次在不敏感波長(zhǎng)(W2)，兩次測(cè)定間不移動(dòng)ELISA板的位置。例如OPD用492nm為W1，630nm為W2，zui終測(cè)得的A值為兩者之差(W1-W2)。雙波長(zhǎng)式測(cè)讀可減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

選擇

◎試劑應(yīng)從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡(jiǎn)便性、安全性及經(jīng)濟(jì)性全面評(píng)價(jià)。

◎靈敏度：有二層含義，1)為試劑檢出被檢物質(zhì)的zui低量的能力；2)為試劑對(duì)大量樣品中陽性檢出的能力。

◎特異性：常用交叉反應(yīng)率表示。含有與待測(cè)物相近結(jié)構(gòu)部份的物質(zhì)可能存在交叉反應(yīng)，使測(cè)定結(jié)果升高，可能導(dǎo)致假陽性，所以交叉反應(yīng)是評(píng)價(jià)其質(zhì)量的關(guān)鍵指標(biāo)。

◎精密度：ELISA試劑一般指其批內(nèi)CV%，其值應(yīng)小于15%；定量試劑應(yīng)同時(shí)考察線性范圍。

◎準(zhǔn)確度：通過添加回收實(shí)驗(yàn)進(jìn)行評(píng)價(jià)。

◎簡(jiǎn)便性：指在不影響試劑的前三項(xiàng)指標(biāo)的前題下，實(shí)驗(yàn)和測(cè)定步驟越少越好，在定性實(shí)驗(yàn)中結(jié)果判斷簡(jiǎn)單明了，定量試驗(yàn)結(jié)果計(jì)算也應(yīng)簡(jiǎn)單。

◎安全性：指試劑對(duì)操作者和環(huán)境安全無害無傳染性。

◎經(jīng)濟(jì)性：試劑在同等質(zhì)量條件下通過大規(guī)模生產(chǎn)或技術(shù)進(jìn)步降低成本，而市場(chǎng)價(jià)格比較合理。

◎試劑評(píng)價(jià)：需要有的確證方法和確證的樣品進(jìn)行檢測(cè)。

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