鹿胰島素樣生長因子結合蛋白-3 ELISA試劑盒(BD)
操作過程中可能出現的問題和解決方法:
為什么ELISA試劑盒出現白板,陽性對照不顯色?
1、未加A、B顯色液——不要漏加A液和B液
2、洗滌液配制有誤——請按說明書所示稀釋倍數配制
3、未加酶結合物而認為已加入——注意不要漏加
4、終止液誤作洗滌液稀釋或當底物液使用——每次加液前均應看清標簽
鹿胰島素樣生長因子結合蛋白-3 ELISA試劑盒(BD)為什么ELISA試劑盒顯色淡,靈敏度偏低?
1、試劑盒在運輸途中時間太長,溫度太高——盡量縮短運輸時間,夏季應放冰塊降溫
2、試劑盒未充分平衡——試劑盒從2~8℃冰箱取出后打開盒蓋,于室溫平衡至少20分鐘,確保所有試劑已平衡至室溫(約25℃)。
3、培養箱溫度不足37℃——注意培養箱溫度,放入反應板后盡量減少開啟次數以免影響溫度恒定,非隔水式培養箱尤其應注意
4、保溫時間不足——校正定時鐘準確定時
5、洗滌時沖擊力太大、浸泡時間過長、洗滌次數增加——按說明書要求保留洗滌時間,準確記住洗滌次數
6、移液器吸液量不足,吸嘴內壁掛水太多或內壁不清潔——校正移液器,吸嘴要配套,裝吸嘴時要緊密,吸嘴內壁要清潔,一次性使用
7、蒸餾水水質有問題——使用新鮮合格的蒸餾水
8、底物作用時間不足——準確定時
鹿胰島素樣生長因子結合蛋白-3 ELISA試劑盒(BD)為什么ELISA試劑盒重復性不佳?
1、樣品數量多少不一,加樣時間有長有短——重復某一樣品時,加樣時間盡可能與*次接近
2、保溫時間不*,洗滌條件不*,操作人員不*——重復測定標本,操作條件、人員等應盡可能與上次保持*,以排除這些因素造成的不*的可能性
3、加樣量不*——樣品稀釋前應充分混勻,盡可能使用同一移液器并裝緊吸嘴
鹿胰島素樣生長因子結合蛋白-3 ELISA試劑盒(BD)為什么ELISA試劑盒背景深,全部呈有色,臨界對照OD值超出規定范圍?
1、洗滌不充分,洗后未拍干,樣品中其它成分殘留或酶標記物殘留——濃縮洗液準確配制;10倍濃縮洗滌液如有結晶則應讓結晶于室溫全部溶解后再量取稀釋;充分洗滌,*拍干。加樣或加酶拍板的濾紙應棄去不用,不要反復使用,否則易造成污染
2、樣品污染——樣品應新鮮采集,或低溫保存,防止污染
3、培養箱溫度超過37℃或反應時間過長——調整培養箱溫度,準確定時
4、吸嘴重復使用,未洗凈或消毒不*——吸嘴盡可能一次性使用
5、蒸餾水被污染——使用新鮮蒸餾水
6、酶等試劑混用——不同批號試劑勿混用
7、一次實驗的標本量過多,加樣時間太長,導致實際反應時間延長——合理安排實驗,避免幾塊酶標板同時加樣.
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