日韩午夜在线观看,色偷偷伊人,免费一级毛片不卡不收费,日韩午夜在线视频不卡片

上海雅吉生物科技有限公司

植物總DNA的快速少量抽提實驗

時間:2015-1-29閱讀:539
分享:

DNA分子是分子生物學研究的基本材料,依不同的實驗目的可采取不同的抽提方法獲取數(shù)量和質量不等的DNA。實驗目的是了解植物DNA抽提的主要方法,掌握CTAB法快速抽提水稻DNA。

實驗方法原理    CTAB法:該方法簡便、快速,DNA產量高(純度稍次,適用于一般分子生物學操作)。 CTAB是一種非離子去污劑,植物材料在CTAB的處理下,結合65 °C水浴使細胞裂解、蛋白質變性、DNA被釋放出來。CTAB與核酸形成復合物,此復合物在高鹽(>0.7 mM)濃度下可溶,并穩(wěn)定存在,但在低鹽濃度(0.1-0.5 mM NaCl)下CTAB-核酸復合物就因溶解度降低而沉淀,而大部分的蛋白質及多糖等仍溶解于溶液中。經離心棄上清后,CTAB-核酸復合物再用70-75%酒精浸泡可洗脫掉CTAB。再經過氯仿/異戊醇(24:1) 抽提去除蛋白質、多糖、色素等來純化DNA,zui后經異丙醇或乙醇等DNA沉淀劑將DNA沉淀分離出來。
實驗材料    水稻葉片
試劑、試劑盒    液氮CTAB氯仿異戊醇乙醇NH4ACEtOH
儀器、耗材    離心管離心機
實驗步驟    
1.  采集適量幼嫩葉片,用液N2研成粉末,0.4 g裝入1.5 ml離心管中(-20 ℃預冷)。

2.  預熱1.5×CTAB到95 ℃,加1 ml到裝有葉片粉末的離心管中,混勻(防止凍融)。

3.  立即置于65 ℃水浴30min,每5分鐘,上下顛倒1次。

4.  12000 g離心5分鐘。

5.  吸取上清液約600 μl,加入等體積(600 μl)氯仿/異戊醇(24:1),上下顛倒數(shù)次,至下層液相呈深綠色為止。

6.  12000 g離心5分鐘。

7.  取450 μl上清于一新1.5 ml離心管,加入1 ml 95%乙醇和45 μl 10 M NH4AC),混勻,室溫放置10min。

8.  12000 g離心10min,去上清,用75% EtOH浸洗沉淀,自然干燥約30 min。

9.  加入50 μl 1/10 TE或無菌水(含20 mM/RNase),置于4 ℃,待DNA溶解后,檢測DNA濃度及質量。
收起 
注意事項    
1.  盡量取材幼嫩葉片,如太老,酚類物質多,必須用10 mM的β-ME處理。

2.  研缽預凍,粉末至加CTAB前不要融化。

3.  24:1的氯仿/異戊醇抽提時動作應輕柔,轉移用的槍頭是剪寬了的。

4.  所用試劑必需滅菌,手套。



會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~

以上信息由企業(yè)自行提供,信息內容的真實性、準確性和合法性由相關企業(yè)負責,環(huán)保在線對此不承擔任何保證責任。

溫馨提示:為規(guī)避購買風險,建議您在購買產品前務必確認供應商資質及產品質量。

在線留言
主站蜘蛛池模板: 绥阳县| 怀远县| 南木林县| 闽清县| 车险| 南宫市| 三门峡市| 和平县| 织金县| 鞍山市| 旺苍县| 福安市| 潮州市| 缙云县| 工布江达县| 肇源县| 泰来县| 秀山| 深水埗区| 若羌县| 博爱县| 襄樊市| 陇川县| 北宁市| 上杭县| 方山县| 三门峡市| 唐河县| 苍溪县| 临泉县| 永善县| 灵丘县| 隆回县| 长治县| 宜兰县| 平顶山市| 太仓市| 英吉沙县| 渭南市| 扶余县| 化德县|